台湾におけるジャスミンに起因する茎カンカーの初報告

First Report of Stem Canker Caused by on jasmine in Taiwan.

抄録

種は、森林樹木、観葉植物、作物に感染し、根腐れ、果実腐れ、茎キャンカー、葉斑などを引き起こす（Yang et al.2018）。2021年2月、台湾の彰化（24°01'57.7 "N 120°34'54.7 "E） において、約10～20％のジャスミン植物に茎キャンカー、足腐れ、枯れ込みが確認された。発病株は最初、葉色不良、葉の落下、枯死が見られた。感染した茎には陥没した病斑が認められ、徐々に拡大した。やがて株は枯れ，病斑には黒点が形成された。6検体の健常組織と感染組織の縁を4つに切り、10% NaOClで30秒間消毒し、滅菌蒸留水で1分間2回洗浄した後、28℃、12時間明暗サイクルで水寒天培地にて培養した。分離した組織から生育した菌糸をポテトデキストロース寒天培地(PDA)で継代培養した。その結果、いずれの組織からも同様のコロニー形態が観察された。異なる組織から2つの菌糸先端を代表として分離し、BCRC番号FU31566およびFU31567で台湾新竹市のBioresource Collection and Research Centerに寄託した。PDA上のコロニーは白色から淡灰色で，黒色の菌糸分生子を生じた。2週間後の子実体は小集団で散在または集合し，0.3〜1.1 mmのクリーム色から淡黄色の子実体小滴を滲み出した（n=50）。α-分生子は単細胞で、1〜2個の液滴を持つ卵形〜円筒形、3.8〜6.3 × 2.5-3.8 μm (n=50)。 β-分生子は存在しなかった。2つの分離株の内部転写スペーサー（ITS）、翻訳伸長因子サブユニット1-α（EF1α）およびβ-チューブリンを、それぞれITS1/ITS4（White et al. 1990）、EF1-728F/EF1-986R（Carbon and Kohn 1999）および Bt2a/Bt2b (Glass and Donaldson, 1995) のプライマーペアを用いて増幅した。2株のITS (MZ389113, MZ389114), EF1α (MZ419338, MZ419339), β-チューブリン (MZ408893, MZ408894) 配列は98.55-98.56% (KR936130), 98.82% (KR936133)、99.11-99.33% (KR936132) がそれぞれR.G. Shivas, Vawdery & Y.P. Tan ex-type isolate BRIP 62248a (Dissanayake et al. 2017) のものに一致した。形態学的および分子的な特徴から、本菌は.病原性を確認するため，8か月齢の切り花ジャスミン苗の針傷した茎基部に，菌縁が活発に増殖した2枚のPDAディスク，または約2×105個/mlの濃度で分生子懸濁液により，BCRC FU31566を接種した。各方法は5本の苗に接種し、25±2℃の温室内で行った。接種していない植物を対照とした。接種から2週間後、菌培養物のPDAディスクを接種した3本の植物に萎れが見られ、茎の基部に分生子が形成された。また、接種3週間後に分生子懸濁液を接種した1株にも同様の症状が見られた。一方、対照は無症状のままであった。接種した植物から菌を再単離することにより、コッホの定説を完成させた。再単離した病原菌は、オリジナルと同様の形態と分子特性を示した。 は、オーストラリアのカカオ腐敗茎、中国のキウイフルーツ茎キャンカー、台湾のボストンアイビー葉斑を引き起こすことが報告されている（Crousら2015、Baiら2017、Huangら2021、FarrとRossman 2021）。我々の知る限り、台湾で関連するジャスミンのステムカンカーが報告されたのは今回が初めてである。さらに、ジャスミンを宿主とする世界初の記録である。

species can infect forest trees, ornamentals, and crops, causing root and fruit rots, stem cankers, leaf spots, etc. (Yang et al. 2018). In February 2021, about 10-20% of jasmine plants showing stem canker, foot rot, and wilting were observed in Changhua (24°01'57.7"N 120°34'54.7"E), Taiwan. The diseased plants initially showed chlorosis, leaf drop, and dieback. Sunken lesions were observed on the infected stem and kept expanding gradually. Eventually, plants wilted and black spots formed on the lesions. The margin of healthy and infected tissues of six samples were cut into 4 pieces, disinfected with 10% NaOCl for 30 seconds, rinsed twice in sterilized distilled water for 1 minute, and cultured on water agar at 28℃ under 12 h light / 12 h dark cycle. Hyphae grown out from isolated tissues were sub-cultured on potato dextrose agar (PDA). All tissues grown out of fungi showed similar colony morphology. Two hyphal tips from different tissues were isolated as representatives and deposited in Bioresource Collection and Research Center, Hsinchu, Taiwan, under BCRC numbers FU31566 and FU31567. The colonies on PDA were white to pale gray and produced black pycnidial conidiomata. The two-week-old conidiomata scattered or aggregated in small groups, exuded cream to pale yellow conidial droplets, 0.3-1.1 mm (n=50). The α-conidia were one-celled, hyaline, ovoid to cylindrical with one or two droplets, 3.8-6.3 × 2.5-3.8 μm (n=50). β-conidia were absent. The internal transcribed spacer (ITS), translational elongation factor subunit 1-α (EF1α), and β-tubulin of the two isolates were amplified using primer pairs ITS1/ITS4 (White et al. 1990), EF1-728F/EF1-986R (Carbone and Kohn 1999), and Bt2a/Bt2b (Glass and Donaldson, 1995), respectively. The ITS (MZ389113, MZ389114), EF1α (MZ419338, MZ419339), and β-tubulin (MZ408893, MZ408894) sequences of two isolates showed 98.55-98.56% (KR936130), 98.82% (KR936133), and 99.11-99.33% (KR936132) match to those of R.G. Shivas, Vawdery & Y.P. Tan ex-type isolate BRIP 62248a (Dissanayake et al. 2017), respectively. Based on the morphological and molecular characters, this fungus is identified as . To confirm the pathogenicity, the needle-wounded stem bases of eight-month-old cutting jasmine seedlings were inoculated with BCRC FU31566 by two PDA disks with actively grown fungal edges or conidial suspension at the concentration of approximately 2 × 105 conidia/ml. Each method inoculated five seedlings, performed in the greenhouse at 25 ± 2°C. Non-inoculated plants served as control. Two weeks after inoculation, three plants inoculated with PDA disks of the fungal culture showed wilting, and conidiomata formed on the stem base. The same symptoms were observed in one plant inoculated with the conidial suspension 3 weeks after inoculation. By contrast, the controls remained symptomless. Koch's postulates were completed by re-isolating the fungus from the inoculated plant. The re-isolated pathogen showed similar morphology and molecular characteristics to the original. has been reported to cause cocoa rotted stem in Australia, kiwifruit stem canker in China, and Boston ivy leaf spot in Taiwan (Crous et al. 2015; Bai et al. 2017; Huang et al. 2021; Farr and Rossman 2021). To our knowledge, this is the first report of stem canker on jasmine associated with in Taiwan. Furthermore, this is the first record of jasmine as a host of worldwide.