A型ボツリヌス神経毒に対する中和抗体の作製と特性評価

Production and characterization of a neutralizing antibody against botulinum neurotoxin A.

抄録

ボツリヌス毒素（BoNT）は、カテゴリーA毒物として、ヒトのボツリヌス中毒の原因となり、推定致死量は1ng/kgで、生物兵器として使用される可能性が非常に高くなっています。そのため、抗BoNT抗体の開発は急務である。本論文では、BoNT/AのHドメインを精製し、Balb/cマウスに免疫した。55の安定した陽性ハイブリドーマ細胞株からBoNT/Aに対するモノクローナル抗体をスクリーニングし、最も強い中和活性を持つものをML06と名付け、サブクローン化、配列決定し、IgG1（κ）サブクラスと分類された。マウス保護実験により、ML06はBoNT/Aの毒素をin vitroおよびin vivoで用量依存的に効果的に中和できることが確認された。また，4LDのBoNT/Aを注射したマウスのうち，4時間後に再度ML06を注射しても20％しか生存できないことがわかった．また，2週間前に投与したML06が4 LD BoNT/Aからマウスを完全に保護することが示された．これらの結果から、ML06はBoNT/Aに対する免疫治療薬の開発に有効であることが示唆された。

As a category A toxic, the botulinum toxin(BoNT) is responsible for human botulism with an estimated lethal dose of 1 ng/kg which greatly increases the potential risk of use as bioweapons. Therefore, the development of anti-BoNT antibodies is urgent. In this paper, the H domain of BoNT/A was purified and immunized with Balb/c mice. Monoclonal antibodies were screened against BoNT/A from 55 stable positive hybridoma cell lines, and one with the strongest neutralizing activity, designated as ML06, was subcloned, sequenced, and classified as IgG1(κ) subclass. The mouse protection assays showed that ML06 can neutralize the toxin of BoNT/A effectively both in vitro and in vivo, in a dose-dependent manner. The therapeutic assays showed that only 20% of mice injected with 4 LD BoNT/A can survive another injection of ML06 after 4 h. The prophylaxis assays showed the residual ML06 from mice injected with ML06 two weeks ago can protect mice against 4 LD BoNT/A challenge completely. Collectively, our results indicated that ML06 served as a good candidate for further development of immune therapeutics for BoNT/A.