デュプレックスデジタルPCRを用いたトランスジェニックダイズイベントDAS-68416-4の検出のための普遍的な定量法を確立した

A universal quantification of transgenic soybean event DAS-68416-4 using duplexdigital PCR.

• Jin Liu
• Zhi-Yong Li
• Jie Dong
• Dong-Wei Gao

抄録

背景:

より多くの国や地域でGM成分のラベリングしきい値や低レベルの存在しきい値が実施されるにつれ、正確な定量化への要求は急速に高まっています。一方、デジタルPCRは、従来のリアルタイム蛍光PCRと比較して、GM成分の定量に大きなメリットがあることがわかりました。

BACKGROUND: As labeling thresholds and low level presence thresholds of GM components are implemented in more and more countries and regions, the demands for accurate quantification are increasing rapidly. At the same time, digital PCR showed considerable benefits compared with former real-time fluorescence PCR in GM component quantification.

結果:

トランスジェニックダイズイベントDAS-68416-4の検出のために、デュプレックスデジタルPCRを用いたユニバーサル定量法を確立した。DAS-68416-4イベント特異的遺伝子とレクチン参照遺伝子の絶対LOQは、液滴デジタルPCRではそれぞれ0.61 copies/μLと4.6 copies/μLであり、チップデジタルPCRでは0.522 copies/μLと5.192 copies/μLであった。DAS-68416-4のパーセンテージ含有率の相対的なLOQは、2つのデジタルPCRシステムの両方で0.1％であった。

RESULTS: A universal quantification method using duplex digital PCR was established for detection of transgenic soybean event DAS-68416-4. The absolute LOQs of DAS-68416-4 event-specific gene and lectin reference gene were 0.61 copies/μL and 4.6 copies/μL respectively in droplet digital PCR, while 0.522 copies/μL and 5.192 copies/μL in chip digital PCR. The relative LOQs of DAS-68416-4 percentage content was 0.1% in both two digital PCR systems.

結論:

遺伝子コピー率は、トランスジェニック成分の内容物に国際的に使用されている普遍的な発現手段です。デジタル PCR は特定の遺伝子に対して絶対的な定量を行うため、トランスジェニック成分の検出に適していると考えられる。本研究では、トランスジェニック大豆イベントDAS-68416-4を用いてそのことを証明した。その結果、繰り返し精度、定量的な線形関係、相対的なLOQなど、二重鎖デジタルPCRの技術的性能は、トランスジェニック成分の定量ニーズを完全に満足させていることが示された。この記事は著作権で保護されています。すべての権利を保有しています。

CONCLUSION: Gene copy ratio is the universal means of expression internationally used in transgenic component contents. Digital PCR executes absolute quantification on specific genes, thus is considered to be suitable for detection of transgenic component contents. It was proved in this research on transgenic soybean event DAS-68416-4. Results indicated perfect satisfaction for transgenic component quantification needs in various technical performances of duplex digital PCR including repeatability, quantitative linear relationship and relative LOQs. This article is protected by copyright. All rights reserved.

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