miR-708 と miR-335-3p はオートファジーの抑制を介して網膜神経節細胞のアポトーシスを抑制する

miR-708 and miR-335-3p Inhibit the Apoptosis of Retinal Ganglion Cells Through Suppressing Autophagy.

• Qiuli Zhang
• Chang He
• Ruizhuang Li
• Yi Ke
• Kaidi Sun
• Jiaqi Wang

抄録

本研究では、緑内障における網膜神経節細胞（RGC）のオートファジーおよびアポトーシスにおけるmiR-708およびmiR-335-3pの制御機構を明らかにすることを目的とした。慢性緑内障マウスをレーザー光凝固法で樹立した。その結果、網膜神経節細胞のオートファジー、アポトーシス、ATG3、オートファジー、アポトーシス、オートファジー、ATG3の発現量をqRT-PCRで検出した。ATG3、オートファジー関連タンパク質LC3およびp62のタンパク質量をウェスタンブロットで検出した。RGCsのアポトーシスはフローサイトメトリーで検出した。ATG3におけるmiR-335-3p/miR-708の調節役割は、デュアルルシフェラーゼレポーター遺伝子により確認された。また、慢性緑内障マウスおよびRGCの網膜組織を加圧下で測定した結果、miR-335-3pおよびmiR-708の両方がダウンレギュレーションされていることがわかった。また、miR-708とmiR-335-3pを阻害することで、オートファジーを促進してRGCsのアポトーシスを誘導した。また、miR-708とmiR-335-3pはATG3に結合し、ATG3を標的として制御していた。さらに、miR-708/miR-335-3pとの干渉は、ATG3をアップレギュレーションしてオートファジーを促進することでRGCのアポトーシスを誘導した。総じて、miR-708およびmiR-335-3pのダウンレギュレーションは、緑内障におけるオートファジーの促進を介してRGCのアポトーシスに寄与していた。

This study aimed to clarify the regulation role of miR-708 and miR-335-3p in retinal ganglion cell (RGC) autophagy and apoptosis in glaucoma. Chronic glaucoma mice were established by laser photocoagulation. RGCs were isolated and transfected with a series of plasmids and the cultured in 60 mmHg pressure. miR-335-3p, miR-708, and ATG3 mRNA expressions were detected by qRT-PCR. Protein levels of ATG3, autophagy-related protein LC3, and p62 were detected by Western blot. The apoptosis of RGCs was detected by flow cytometry. The regulation role of miR-335-3p/miR-708 in ATG3 was confirmed by the dual-luciferase reporter gene. The expressions of several miRNAs were measured in retinal tissues from chronic glaucoma mice and RGCs under pressure conditions, and results showed that both miR-335-3p and miR-708 were down-regulated. Besides, the inhibition of miR-708 and miR-335-3p induced the apoptosis of RGCs through promoting autophagy. Also, miR-708 and miR-335-3p could bind to ATG3 and targeted regulated ATG3. Furthermore, the interference with miR-708/miR-335-3p induced RGC apoptosis by up-regulating ATG3 to promote autophagy. In general, the down-regulation of miR-708 and miR-335-3p contributed to the apoptosis of RGCs through promoting autophagy in glaucoma.