マルチプレックスPCRによる多ウイルス性セロウイルス4hの迅速検出

Rapid Detection of Hypervirulent Serovar 4h by Multiplex PCR.

• Youwei Feng
• Hao Yao
• Sisi Chen
• Xiaowen Sun
• Yuelan Yin
• Xin'an Jiao

抄録

()は14の血清型からなるユビキタス食中毒性病原体であるが，その中でも4hセロバー4hは最近報告された新しい血清型である．ハイブリッド亜系統IIに属するSerovar 4hは多ウイルス性を示す．従来の生化学的検査や広く用いられているPCRを用いた血清群分類法では，セロバー4h株を区別することはできなかった．本研究では，血清型4h株を迅速に検出するための新しいマルチプレックスPCR法を開発した．マルチプレックスPCR法の結果，血清型4h株は，様々な血清種，種属，その他の種を含むすべての試験済み株から特異的に同定できることが示された．マルチプレックスPCRの検出限界は、ゲノムDNAで291 fg/μL、細菌懸濁液で5.5×10 CFU/mLであった。さらに、1.8×10-1.8×10 CFU/10gの濃度で人為的に血清型4hを汚染した豚肉を10-16時間以内に検出することに成功した。 以上の結果から、高い特異性と感度を有するマルチプレックスPCRは、血清型4h株の迅速な検出に適用可能であることが明らかになった。

() is a ubiquitous foodborne pathogen that comprises 14 serotypes, of which serovar 4h is a novel serotype recently reported. Serovar 4h belonging to hybrid sub-lineage II exhibit hypervirulent features. Conventional biochemical tests and widely used PCR-based serogrouping schemes could not distinguish serovar 4h strains. In this study, we developed a new multiplex PCR assay for rapid detection of serotype 4h . Three primer pairs based on the target genes, LMxysn_1095, , and , were designed. The multiplex PCR results showed that serovar 4h strains could be specifically identified from all tested strains, including various serovars, spp., and other species. The detection limits of the multiplex PCR were 291 fg/μL for genomic DNA and 5.5 × 10 CFU/mL for bacterial suspension. Furthermore, pork meat artificially contaminated with serovar 4h in a concentration of 1.8 × 10-1.8 × 10 CFU/10 g were successfully detected within 10-16 h. These results demonstrate that the multiplex PCR with high specificity and sensitivity is applicable for the rapid detection of serotype 4h strains.

Copyright © 2020 Feng, Yao, Chen, Sun, Yin and Jiao.