ミリ秒 H/D 交換質量分析を使用した血管内皮成長因子 A の拡張コンストラクト上での臨床前の Bevacizumab (Avastin) バイオシミラーのエピトープ マッピング

Epitope Mapping for a Pre-Clinical Bevacizumab (Avastin) Biosimilar on an Extended Construct of Vascular Endothelial Growth Factor-A using Millisecond H/D Exchange Mass Spectrometry.

• Kerene A Brown
• Cristina Lento
• Shanthi Rajendran
• Jason Dowd
• Derek J Wilson

抄録

血管内皮成長因子 A (VEGF-A) を標的とするモノクローナル抗体 (mAb) 抗がん剤である Bevacizumab (Avastin) の成功を受けて、バイオシミラーの開発が進められています。エピトープマッピングを用いて標的エピトープの類似性を確立することは、前臨床のmAbバイオシミラー開発において重要なステップである。ここでは、Time Resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen Deuterium Exchange Mass Spectrometry (TRESI-HDX MS) を使用して、市販の Avastin と前臨床開発中のバイオシミラー（ApoBev）のエピトープを VEGF-A の拡張コンストラクト上で迅速に比較しました。我々の実験で決定されたアバスチンとApoBevのエピトープは、お互いに、そしてアバスチンFabドメイン/切り詰められたVEGFの共結晶構造に由来する既知のエピトープと一致しています。しかし、短い（ms）HDXラベリング時間でのみ観察された微妙に異なるアロステリック効果は、ApoBevのためのわずかに異なる結合モードを反映している可能性があります。

The success of Bevacizumab (Avastin), a monoclonal antibody (mAb) anti-cancer drug targeting Vascular Endothelial Growth Factor A (VEGF-A), has motivated the development of biosimilars. Establishing target epitope similarity using epitope mapping is a critical step in pre-clinical mAb biosimilar development. Here we use Time Resolved ElectroSpray Ionization Hydrogen Deuterium Exchange Mass Spectrometry (TRESI-HDX MS) to rapidly compare the epitopes of commercial Avastin and a biosimilar in pre-clinical development (ApoBev) on an extended construct of VEGF-A. The Avastin and ApoBev epitopes determined in our experiments agree with each other and with the known epitope derived from the Avastin Fab domain / truncated VEGF co-crystal structure. However, subtly different allosteric effects observed exclusively at short (ms) HDX labeling times may reflect a slightly different binding mode for ApoBev.