新規円形RNA hsa_circRPPH1_015 は、miRNA-326 媒介の ELK1 阻害を阻害することで、乳癌の癌化に関与している

A Novel Circular RNA hsa_circRPPH1_015 Exerts an Oncogenic Role in Breast Cancer by Impairing miRNA-326-Mediated ELK1 Inhibition.

• Chunming Zhao
• Linlin Li
• Zhiwei Li
• Jiawen Xu
• Qing Yang
• Peng Shi
• Kaining Zhang
• Rui Jiang

抄録

乳癌 (BC) は、異なるサブタイプと高い腫瘍転移の可能性を持つ不均一な疾患です。最近の研究者らは、BCの発症にcircular RNA（circRNA）が関与していることを明らかにしている。ここでは、BC の腫瘍プロモーターとしての新規 circRNA hsa_circRPPH1_015 を明らかにした。 BC患者から、がん性組織と非がん性組織のペアの合計86個の組織を外科的に切除して採取した。細胞増殖、コロニー形成、細胞浸潤をEdu染色、クローン形成アッセイ、ヨウ化プロピジウム(PI)標識フローサイトメトリー、Transwell浸潤アッセイで調べた。PCNA、Ki67、MMP-2、MMP-9、Cyclin D1、およびCDK4の発現は、ウェスタンブロット分析を用いてアッセイした。RNAプルダウン、デュアルルシフェラーゼレポーター遺伝子アッセイ、およびRNA結合タンパク質免疫沈降（RIP）アッセイを行い、hsa_circRPPH1_015、microRNA-326（miR-326）、およびELK1の関係を調べた。ヌードマウスを用いてヒトBC細胞MCF-7細胞の皮下キセノグラフトによる腫瘍増殖を評価したところ、BC組織ではhsa_circRPPH1_015の発現がアップレギュレートされていた。hsa_circRPPH1_015のノックダウンはMCF-7の攻撃的な行動を抑制した。hsa_circRPPH1_015はELK1を負に制御するmiRNA-326に結合していた。miRNA-326の発現が上昇すると、MCF-7の細胞増殖、コロニー形成、細胞侵入が抑制された。miRNA-326の発現を低下させたり、ELK1を過剰発現させたりすると、hsa_circRPPH1_015欠損MCF-7細胞の増殖性と攻撃性が回復した。また、内因性の hsa_circRPPH1_015 発現を欠損したヌードマウスでは、MCF-7 細胞の腫瘍増殖が抑制された。 全体的に、本研究は、hsa_circRPPH1_015がBCにおける癌遺伝子であり、予後不良因子であることを示しており、BCに対する絶妙な治療標的を提供している。

Breast cancer (BC) represents a heterogeneous disease with distinct subtypes and high tumor metastatic potentials. Recent researchers identify the implication of circular RNAs (circRNAs) in the initiation of BC. Herein, we uncover a novel circRNA hsa_circRPPH1_015 as a tumor promoter in BC. A total of 86 paired cancerous and non-cancerous tissues were surgically resected and collected from BC patients. Cell proliferation, colony formation, and cell invasion were examined by Edu staining, clone formation assays, propidium iodide (PI)-labeled flow cytometry, and Transwell invasion assays. PCNA, Ki67, MMP-2, MMP-9, Cyclin D1, and CDK4 expression was assayed using Western blot analysis. RNA pull-down, dual-luciferase reporter gene assay, and RNA binding protein immunoprecipitation (RIP) assay were performed to investigate the relationships among hsa_circRPPH1_015, microRNA-326 (miR-326), and ELK1. The tumor growth of human BC MCF-7 cells was evaluated in nude mice by subcutaneous xenografts of MCF-7 cells. hsa_circRPPH1_015 expression was upregulated in BC tissues. Knockdown of hsa_circRPPH1_015 restrained the aggressive behavior of MCF-7. hsa_circRPPH1_015 could bind to miRNA-326 that negatively regulates ELK1. Elevation of miRNA-326 expression resulted in inhibition of cell proliferation, colony formation, and cell invasion of MCF-7. Disturbance of miRNA-326 or overexpression of ELK1 restored the proliferation and aggressiveness in hsa_circRPPH1_015-depleted MCF-7 cells. Tumor growth of MCF-7 cells was reduced in nude mice lack of endogenous hsa_circRPPH1_015 expression. Overall, the present study demonstrates that hsa_circRPPH1_015 was an oncogene and unfavorable prognostic factor in BC, providing an exquisite therapeutic target for BC.

Copyright © 2020 Zhao, Li, Li, Xu, Yang, Shi, Zhang and Jiang.