酵母からのヘリコバクター・ピロリの放出は、小胞を内包しているか遊離しているかのどちらかである

Helicobacter pylori release from yeast as a vesicle-encased or free bacterium.

• Samira Heydari
• Farideh Siavoshi
• Mir Hadi Jazayeri
• Abdolfattah Sarrafnejad
• Parastoo Saniee

抄録

背景:

酵母は、ヒト集団内での細菌の拡散を促進するHピロリの強力な貯蔵庫であることが示唆されている。酵母からのHピロリ菌の効果的な放出はどのようなメカニズムで行われているのでしょうか？ここでは、小胞封入型または遊離細菌としての酵母からのHピロリの放出が研究された。

BACKGROUND: Yeast has been suggested as a potent reservoir of H pylori that facilitates bacterial spread within human populations. What mechanism ensures effective H pylori release from yeast? Here, H pylori release from yeast as a vesicle-encased or free bacterium was studied.

材料および方法:

カンジダ酵母の液体培養物を光、蛍光、透過型電子顕微鏡法で観察し、放出された小胞を観察した。小胞を分離し、TEMで観察した。小胞の膜中のHピロリ菌特異的タンパク質の検出には、免疫金標識法を用いた。酵母から放出された遊離細菌細胞を免疫磁気分離し、電界放出走査型電子顕微鏡（ＦＥＳＥＭ）で観察した。ビーズ結合細菌のDNAは、H pylori-16S rDNAの増幅に使用した。ビーズ結合菌の生存率は、ライブ/デッド染色およびブルセラ血球寒天培地での培養により調べた。

MATERIALS AND METHODS: Liquid culture of Candida yeast was examined by light, fluorescence and transmission electron microscopy methods to observe the released vesicles. Vesicles were isolated and examined by TEM. Immunogold labeling was used for detection of H pylori-specific proteins in vesicles' membrane. Free bacterial cells, released from yeast, were separated by immunomagnetic separation and observed by field emission scanning electron microscopy (FESEM). DNA of bead-bound bacteria was used for amplification of H pylori-16S rDNA. Viability of bead-bound bacteria was examined by live/dead stain and cultivation on Brucella blood agar.

結果:

顕微鏡で観察したところ、小胞には細菌のような構造物が含まれていることがわかった。酵母からの遊離バクテリアの放出が確認された。免疫金標識により、小胞の膜中にHピロリ菌のタンパク質が存在することが明らかになった。FESEMにより、Hピロリ菌が磁気ビーズに付着していることが確認された。521bp PCR産物の配列決定により、ビーズに結合したHピロリの同一性が確認された。ライブ/デッド染色によりビーズ結合Hピロリの生存率が確認されたが、培養結果は陰性であった。

RESULTS: Microscopic observations showed that vesicles contained bacterium-like structures. Thin sections showed release of vesicle-encased or free bacterium from yeast. Immunogold labeling revealed occurrence of H pylori proteins in vesicles' membrane. FESEM showed attachment of H pylori cells to magnetic beads. Sequencing of 521 bp PCR product confirmed the identity of bead-bound H pylori. Live/dead staining showed viability of bead-bound H pylori but the result of culture was negative.

結論:

膜結合または遊離細菌として酵母からの細胞内Hピロリの脱出は、Hピロリが共生団体の原則である宿主を傷つけない安全な出口機構を使用していることを示しています。ヒトの胃の中では、特定の条件が酵母細胞を刺激して、小胞封入菌または遊離菌としてヘリコバクター・ピロリを放出させる可能性がある。

CONCLUSIONS: Escape of intracellular H pylori from yeast as a membrane-bound or free bacterium indicates that H pylori uses safe exit mechanisms that do not damage the host which is the principle of symbiotic associations. In human stomach, certain conditions may stimulate yeast cells to release H pylori as a vesicle-encased or free bacterium.

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