低病原性鳥インフルエンザウイルス H9N2 サブタイプのヘマグルチニン遺伝子を発現する DNA ワクチンを七面鳥に接種した

Immunization of turkeys with a DNA vaccine expressing the haemagglutinin gene of low pathogenic avian influenza virus subtype H9N2.

• Awad A Shehata
• Shereen Basiouni
• Ahmed Ali
• Mohamed Fawzy
• Hafez M Hafez
• Sebastian Ulbert
• Thomas Vahlenkamp

抄録

低病原性鳥インフルエンザウイルスH9N2は、現在も中東で流行しており、家禽の呼吸器症状や経済的損失の原因となっている。本研究では、H9N2 A/CK/Egypt/SCU8/2014のHA遺伝子を標的としたH9プラスミドベースのDNAワクチンを開発し、七面鳥で評価した。HAの全長をサイトメガロウイルスプロモーターの制御下でベクタープラスミドにクローニングした。組換えHAのインビトロ発現は、プラスミドpVAX1-H9またはpCR-H9でトランスフェクトしたHeLa細胞において、ウエスタンブロットおよび免疫蛍光アッセイ（IFA）を用いて実証した。pVAX-H9およびpCR-H9の有効性は、七面鳥の家禽を用いて、3週間後にA/CK/Egypt/SCU8/2014（ワクチン接種3週間後に10 EID/鳥）で挑戦して評価された。有効性の評価は、ウイルスの脱落、口咽頭および回頭、および血球凝集抑制（HI）試験による血清転換に基づいて行った。ワクチン接種後3週目には，すべての接種鳥で高いHI抗体価（7～8 log）を示した．裸ワクチンまたはサポニン添加pVAX-H9またはpCR-H9を接種した鳥はいずれも臨床症状を示さなかった。pVAX-H9およびpCR-H9単独では、口唇および口咽頭ウイルスの脱落は防げなかったが、サポニンを添加したpVAX1-H9およびpCR-H9では、それぞれチャレンジ後3日目および5日目に口唇および口咽頭ウイルスの脱落を防いだ。結論として、pVAX1-H9とpCR-H9を用いたDNAワクチン接種は七面鳥をH9N2ウイルスから保護することができたが、接種レジームを改善する必要がある。

Low pathogenic avian influenza H9N2 is still circulating in the Middle East causing respiratory manifestations and severe economic losses in poultry. In the present study, an H9 plasmid-based DNA vaccine targeting the HA gene of H9N2 A/CK/Egypt/SCU8/2014 was developed and evaluated in turkeys. The full length of HA was cloned into vector plasmids under the control of a cytomegalovirus promoter. The in-vitro expression of the recombinant HA was demonstrated in HeLa cells transfected with the plasmids pVAX1-H9 or pCR-H9 using western blot and Immunofluorescent assay (IFA). The efficacy of pVAX-H9 and pCR- H9, naked or saponin-adjuvanted, was evaluated in turkey poults at 3 weeks and challenged with A/CK/Egypt/SCU8/2014 (10 EID/bird at 3 weeks post-vaccination. The efficacy was assesses based on virus shedding, oropharyngeal and cloacal, as well as seroconversion using haemagglutination inhibition (HI) test. All immunized birds showed high HI antibody titers (7-8 log) at 3 weeks post-vaccination. None of the birds vaccinated with naked or saponin-adjuvanted pVAX-H9 or pCR-H9 showed any clinical signs. The pVAX-H9 and pCR-H9 alone did not prevent cloacal and oropharyngeal virus shedding, however, saponin-adjuvanted pVAX1-H9 and pCR-H9 prevented cloacal and oropharyngeal virus shedding at 3 and 5 days post challenge, respectively. In conclusion, DNA vaccination with pVAX1-H9 and pCR-H9 could protect turkey from the H9N2 virus, but vaccination regimes need to be improved.

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