lncRNA MALAT1 の枯渇は、腎細胞癌における miR-362-3p 媒介 G3BP1 の調節を介してスニチニブ抵抗性を抑制した

Depletion of lncRNA MALAT1 inhibited sunitinib resistance through regulating miR-362-3p-mediated G3BP1 in renal cell carcinoma.

• Zhujuan Wang
• Xiong Chang
• Guannan Zhu
• Xiaoting Gao
• Luyuan Chang

抄録

肺腺癌転写物1（MALAT1）に関連するロングノンコーディングRNA転移は、一部の癌では化学療法抵抗性に寄与するが、癌（RCC）のスニチニブ（SU）化学抵抗性におけるMALAT1の役割は未だ不明である。本研究では、SU耐性腫瘍組織および細胞におけるMALAT1の発現をqRT-PCRで調べた。次に、CCK-8、アネキシンV-FITC/PI、トランスウェル、およびウェスタンブロッティングアッセイを用いて、MALAT1に対するsmall interfering RNAをトランスフェクションした後のSU抵抗性RCC細胞の細胞生存率およびIC50、アポトーシス、細胞浸潤および抵抗性を評価した。さらに、RNAプルダウン法とルシフェラーゼレポーターアッセイを用いて、SU抵抗性におけるMALAT1の発現機構を調べた。その結果、MALAT1の発現はSU抵抗性RCCの組織や細胞株において劇的にアップレギュレートされていることが示された。MALAT1のノックダウンは、増殖、浸潤およびSU化学抵抗性を抑制したが、RCC細胞ではアポトーシスを誘導した。RNAプルダウンおよびルシフェラーゼレポーターアッセイの結果、MALAT1はmiR-362-3pと相互作用し、miR-362-3pはRasGAP SH3-domain-Binding Protein 1（G3BP1）と相互作用することが明らかになった。さらに、G3BP1はRCC細胞のSU化学抵抗性にも関与しており、MALAT1はmiR-362-3pのスポンジとしてG3BP1の発現を調節している可能性が示唆された。レスキュー実験により、miR-362-3pのダウンレギュレーションとG3BP1の過剰発現が、RCC細胞におけるMALAT1ノックダウンのSU化学感受性を逆転させることが示唆された。結論として、LncRNA MALAT1の枯渇は、RCC細胞におけるmiR-362-3pのスポンギングを介してG3BP1を調節することでSU化学抵抗性を阻害し、MALAT1を標的とすることがSU抵抗性RCCの潜在的な治療戦略である可能性を示唆している。

Long non-coding RNA metastasis associated with lung adenocarcinoma transcript 1 (MALAT1) contributes to chemotherapy resistance in some cancers, but the role of MALAT1 in sunitinib (SU) chemoresistance of carcinoma (RCC) is still unknown. In this study, MALAT1 expression in SU-resistance tumor tissues and cells was tested by qRT-PCR. Then, CCK-8, Annexin V-FITC/PI, transwell, and Western blotting assays were used to evaluate cell viability and IC50, apoptosis, cell invasion, and resistance of SU-resistance RCC cells after transfected with small interfering RNA against MALAT1. Further, RNA pull-down and luciferase reporter assay were applied to investigate the underlying mechanism of MALAT1 in SU resistance. The results showed that MALAT1 expression was dramatically upregulated in SU-resistance RCC tissues and cell lines. Knockdown of MALAT1 inhibited proliferation, invasion, and SU chemoresistance, but induced apoptosis in RCC cells. The results of RNA pull-down and luciferase reporter assay indicated that MALAT1 could interact with miR-362-3p and miR-362-3p interact with RasGAP SH3-domain-Binding Protein 1 (G3BP1). Moreover, G3BP1 also played a role in SU chemoresistance of RCC cells, and MALAT1 could perform as a miR-362-3p sponge to modulate G3BP1 expression. Rescue experiments suggested that downregulation of miR-362-3p and overexpression of G3BP1 can reverse the SU chemosensitivity of MALAT1 knockdown in RCC cells. In conclusion, depletion of LncRNA MALAT1 inhibited SU chemoresistance through modulating G3BP1 via sponging miR-362-3p in RCC cells, suggesting that targeting MALAT1 may be a potential therapeutic strategy for SU-resistance RCC.