飼い猫の脳脊髄液および血清サンプル中のセミネステッドPCRによる分子検出（）

Molecular Detection of by Semi-Nested PCR in Cerebrospinal Fluid and Serum Samples from Domestic Cats ().

• Freddy López-Contreras
• Lisbeth Rojas-Barón
• Marcelo Gómez
• Francisco Morera
• Paulina Sepúlveda
• Manuel Moroni
• Pamela Muñoz
• Gerardo Acosta-Jammett
• Marcelo Mieres
• Jörg Hirzmann
• Carlos Hermosilla
• Anja Taubert

抄録

は、家猫や野生猫に感染し、脊髄のくも膜下腔の静脈に侵入し、主に骨盤四肢の進行性の麻痺を引き起こす血管神経栄養失調性のメタストロンギロイド線虫です。ネコのガーティオーシスの確定診断は、死後の検査で脊髄静脈内の線虫の存在を明らかにすることによってのみ達成することができます。臨床検査所見や画像所見だけでは十分ではないため、決定的な結果が得られる早期診断が必要である。そこで、本研究の目的は、この寄生虫に自然感染した家猫の脳脊髄液（CSF）と血清中の線虫の存在をセミネステッドPCR法で検出することであった。猫のガーティオーシスを示唆する診断を受けた12匹の猫を選び、神経学的および画像検査を行った。DNAサンプルを、ユニバーサル（AaGp28Sa1/AaGp28Ss1）および特異的（Gp28Sa3/Aa28Ss2）プライマー（18S rRNA遺伝子、部分配列、ITS 1、5.8S rRNA遺伝子、ITS 2、完全配列、28S rRNA遺伝子、部分配列）およびセミネステッドPCRにより分析したところ、それぞれ356bpおよび300bpの増幅が得られ、線虫DNAの有無を示した。9匹中4匹の猫のCSF、7匹中7匹の血清から線虫の存在が検出された。7匹中5匹の血清分析では、剖検時の呼吸器系の変化は認められなかったが、混合感染が認められた。PCR分析による寄生虫の検出には，血清サンプルの方がCSFよりも有効であることが提案された．これは、検出の可能性と使用した方法の感度/特異性を示しており、ネコのガーティオーシスの早期かつタイムリーな検出のためのルーチン診断テストとしてセミネスト PCR の実装を示唆しています。

is an angio-neurotropic metastrongyloid nematode that infects domestic and wild cats, invading the veins of the subarachnoid space of the spinal cord and mainly causing progressive paralysis of the pelvic limbs. The definitive diagnosis of feline gurltiosis can only be achieved by post-mortem examination that reveals the presence of the nematode in the spinal cord vein vasculature. An early diagnosis with conclusive results is required since laboratory and imaging findings are not sufficient. Therefore, the purpose of this study was to detect the presence of , via semi-nested PCR, in samples of cerebrospinal fluid (CSF) and the sera of domestic cats naturally infected with the parasite. A total of 12 cats with a diagnosis suggestive of feline gurltiosis were selected, and they underwent a complete neurological and imaging examination. DNA samples were analysed by semi-nested PCR, with universal (AaGp28Sa1/AaGp28Ss1) and specific (Gp28Sa3/Aa28Ss2) primers, for ( 18S rRNA gene, partial sequence; ITS 1, 5.8S rRNA gene, and ITS 2, complete sequence; and 28S rRNA gene, partial sequence) and , obtaining amplifications of 356 and 300 bp, which indicated the presence or absence of nematode DNA, respectively. The presence of was detected in the CSF of four out of nine cats, and the sera of seven out of seven cats. In the sera analysis of five out of seven cats, a mixed infection with was found, despite no alterations of the respiratory tract being observed during the necropsies. It is proposed that serum samples could be more effective than CSF in detecting the parasite by PCR analysis. Sequencing analysis showed high percentages of identity with , which indicated the feasibility of detection and the sensitivity/specificity of the method used, suggesting the implementation of semi-nested PCR as a routine diagnostic test for early and timely detection of feline gurltiosis.