CYP3Aによって代謝される内因性ステロイドの同時定量法の開発と検証

Development and validation of a method for the simultaneous quantification of endogenous steroids metabolized by CYP3A.

• Yujin Lee
• Woori Chae
• Seonghae Yoon
• Jae-Yong Chung
• Joo-Youn Cho

抄録

最も重要な第1相薬物代謝酵素であるチトクロームP450（CYP）3A酵素は、臨床で使用される薬剤の代謝の50％を担っています。CYP3A活性は個人差が大きく、酵素の誘導または阻害によって媒介される副作用や薬物相互作用の確率に影響を与える可能性があります。したがって、予期せぬ薬物反応の発生率を低減するためには、個人のCYP3A活性を予測できることが重要である。CYP3A活性を特異的かつ迅速に測定するために、尿中のコルチゾール、コルチゾン、6β-ヒドロキシシコルチゾール、6β-ヒドロキシシコルチゾンを同時に定量し、血漿中の4β-ヒドロキシコレステロールを定量するために、三重四重極質量分析法をインターフェイスしたガスクロマトグラフィーに基づく方法を開発した。結果は、木炭除去したステロイドを含まない尿と血漿の対照試料をもとに算出した。精度は93.18%〜110.0%、精度は1.96%〜5.34%であった。次に、この方法を韓国の健康な男女の尿と血漿サンプルから内因性ステロイドを測定するために適用した。その結果、すべての検体の検量線は良好な直線性を示し、相関係数(r)は0.9953～0.9999であった。以上のことから、本法はCYP3A活性を予測するための内因性バイオマーカーの測定に用いることができ、新薬候補物質のCYP3Aを介した薬物相互作用の予測に応用できる可能性がある。

Cytochrome P450 (CYP) 3A enzymes, the most important phase 1 drug-metabolizing enzymes, are responsible for 50% of the metabolism of clinically used drugs. CYP3A activity varies widely among individuals, which can affect the probability of adverse drug reactions and drug-drug interactions mediated by the induction or inhibition of the enzyme. Hence, it is important to be able to predict CYP3A activity in individuals to reduce the incidence of unexpected drug responses. To specifically and quickly measure CYP3A activity, we developed method based on gas chromatography interfaced with triple-quadrupole mass spectrometry for the quantification of cortisol, cortisone, 6β-hydroxycortisol, and 6β-hydroxycortisone simultaneously in urine and 4β-hydroxycholesterol in plasma. The results were calculated based on charcoal-stripped steroid-free urine and plasma control samples. The accuracy and precision were 93.18% to 110.0% and 1.96% to 5.34%, respectively. This method was then applied to measure endogenous steroids from urine and plasma samples of healthy Korean males and females. The calibration curves of all analytes showed good linearity with a correlation coefficient (r) that ranged from 0.9953 to 0.9999. Therefore, this validated method can be used to measure endogenous biomarkers to predict CYP3A activity and might be applicable in the prediction of CYP3A-mediated drug interactions of new drug candidates.

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