繁殖期と無繁殖期に採取した休眠鹿（Dama dama, Linnaeus 1758）の卵子の死後回復、体外での成熟、受精

Postmortem recovery, in vitro maturation and fertilization of fallow deer (Dama dama, Linnaeus 1758) oocytes collected during reproductive and no reproductive season.

• S Uccheddu
• E Pintus
• J J Garde
• L Fleba
• M Muzzeddu
• F Pudda
• L Bogliolo
• A Strina
• S Nieddu
• S Ledda

抄録

生息地の劣化は、個体群の小規模化・分断化、遺伝的多様性の低下、時間の経過とともに繁殖力の低下をもたらす。繁殖支援技術は、生物多様性の劇的な損失に対処するための重要なツールである。商業的価値が高く広い分布を持つ休眠鹿（Dama dama）は、絶滅の危機に瀕している子ジカの研究に最も適したモデルである可能性がある。この研究では、繁殖期と無繁殖期の休眠ジカから死後に卵子を回収し、体外熟成（IVM）を行った。4頭の成体男性から電気泳動で回収した凍結保存された解凍精子サンプルの能力をIVM卵子の体外受精で試験した。卵巣あたりに回収された卵子の数は、繁殖期の6.2±0.92から無繁殖期の10.4±1.26まで、季節によって有意に異なっていた（p = 0.006）。繁殖期に採取した卵子は、無繁殖期に比べて体外受精率が高かった(p = 0.045)。しかし、胚盤胞期に達した胚はなかった。電気泳動で得られた精液サンプルは凍結保存に成功したが、凍結保存のプロセスはほとんどの運動パラメータに悪影響を及ぼした（主に解凍後2時間）。さらに、急速精子の割合は新鮮なサンプルと解凍後2hの間で有意に減少したが、遅い精子の割合は同じ期間で増加した（p < 0.05）。本研究は、休眠期のシカにおける生殖補助技術の適用のためのロジスティックなステップを提供し、遺伝資源バンクの計画に大きな関心を持つことになるだろう。

Habitat degradation leads to small and fragmented populations, lower genetic variability and fertility overtime. Assisted reproductive techniques represent important tools to cope with the dramatic loss of biodiversity. Fallow deer (Dama dama), beyond its high commercial value and wide distribution, may represent the most suitable model to study endangered cervids. In this study, oocytes were recovered post mortem from fallow deer during the breeding and no breeding seasons and were in vitro matured (IVM). The ability of cryopreserved thawed sperm samples recovered by electroejaculation from 4 adult males was tested by in vitro fertilization of IVM oocytes. The number of oocytes collected per ovary did significantly vary across seasons from 6.2 ± 0.92 during breeding season to 10.4 ± 1.26 during no breeding season (p = 0.006). Oocytes collected during the breeding season showed higher in vitro fertilization rate compared to the no breeding season (p = 0.045). However, no embryos reached the blastocyst stage. Semen samples obtained by electroejaculation were successfully cryopreserved, although the cryopreservation process negatively affected most kinetic parameters, mainly at 2h post-thawing. Moreover, the percentage of rapid spermatozoa significantly decreased between fresh samples and at 2h post thawing, whereas the percentage of slow spermatozoa increased across the same period (p < 0.05). Our study provides the logistic steps for the application of assisted reproductive techniques in fallow deer and might be of great interest for genetic resource bank planning.

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