イヌリンパ腫治療のためのイヌ抗イヌCD20抗体の生成

Generation of a canine anti-canine CD20 antibody for canine lymphoma treatment.

• Takuya Mizuno
• Yukinari Kato
• Mika K Kaneko
• Yusuke Sakai
• Toshinori Shiga
• Masahiro Kato
• Toshihiro Tsukui
• Hirofumi Takemoto
• Akio Tokimasa
• Kenji Baba
• Yuki Nemoto
• Osamu Sakai
• Masaya Igase

抄録

リンパ腫は犬の最も一般的な血液学的癌です。犬のびまん性大細胞型B細胞リンパ腫は、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン（CHOP）の多剤併用化学療法で比較的良好な治療効果を示すが、2年生存率は20％と低い。ヒトB細胞型リンパ腫に対しては、20年前に抗CD20キメラ抗体であるリツキシマブが開発されました。リツキシマブとCHOP化学療法を併用することで、患者の予後改善に大きな成功を収めた。しかし、イヌリンパ腫の治療に使用できる抗イヌCD20抗体は存在しない。本研究では、ラット抗イヌCD20モノクローナル抗体を樹立した。また、臨床応用のために設計されたイヌＣＤ２０に対するラット-イヌキメラ抗体を作製した。このキメラ抗体（4E1-7-B）は、イヌB細胞リンパ腫細胞株CLBL-1に対して、in vitroで抗体依存性細胞傷害性（ADCC）および相補体依存性細胞傷害性（CDC）を示しました。さらに、より強いADCC活性を得るために、デフコシル化した4E1-7-B抗体（4E1-7-B_f）も作製し、4E1-7-Bと比較して10倍の強いADCC活性を示した。4E1-7-B_fは、4E1-7-Bと同様に、免疫不全異種移植マウスモデルにおいてCLBL-1腫瘍の増殖を抑制した。最後に、4E1-7-B_fを単回投与すると、健康なビーグルでは末梢B細胞がかなり減少した。このように、4E1-7-B_fは、イヌのB細胞型リンパ腫に対する良好な抗体医薬の候補である。

Lymphoma is the most common hematological cancer in dogs. Canine diffuse large B cell lymphoma shows a relatively good response to treatment with multi-agent cyclophosphamide, doxorubicin, vincristine, and prednisone (CHOP) chemotherapy; however, the 2-year survival rate is as low as 20%. For human B cell type lymphoma, the anti-CD20 chimeric antibody, rituximab, was developed two decades ago. The combination of rituximab and CHOP chemotherapy was highly successful in improving patient prognosis. However, no anti-canine CD20 antibody is available for the treatment of canine lymphoma. During this study, a rat anti-canine CD20 monoclonal antibody was established. We also generated a rat-canine chimeric antibody against canine CD20 designed for clinical application. This chimeric antibody (4E1-7-B) showed in vitro antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity (ADCC) and complement-dependent cytotoxicity (CDC) against the canine B cell lymphoma cell line CLBL-1. Moreover, to obtain stronger ADCC activity, a defucosylated 4E1-7-B antibody (4E1-7-B_f) was also generated, and it showed tenfold stronger ADCC activity compared with 4E1-7-B. 4E1-7-B_f as well as 4E1-7-B suppressed the growth of CLBL-1 tumors in an immunodeficient xenotransplant mouse model. Finally, a single administration of 4E1-7-B_f induced considerable peripheral B cell depletion in healthy beagles. Thus, 4E1-7-B_f is a good antibody drug candidate for canine B cell type lymphoma.