Lentivirus-Mediated Overexpression of SIVA-1 Reverses Cisplatin Resistance in Gastric Cancer in vitro

Lentivirus-Mediated Overexpression of SIVA-1 Reverses Cisplatin Resistance in Gastric Cancer in vitro.

• Xiao-Tong Wang
• Lei Li
• Fan-Biao Kong
• Xiao-Gang Zhong
• Wei Mai

抄録

SIVA-1は、多くの異なる細胞株においてアポトーシスの誘導に重要な役割を果たし、シスプラチン（DDP）を介した抗腫瘍効果のメカニズムに関与している。しかし、胃癌におけるシスプラチン抵抗性へのSIVA-1の関与は明らかにされていない。DDP耐性に対するSIVA-1の効果を調べるために、組換えpGV358-GFP-SIVA-1レンチウイルスベクターを構築し、ヒトシスプラチン耐性胃癌細胞MKN45/DDPにトランスフェクションした。その後、MKN45/DDP細胞において安定したSIVA-1の過剰発現が確立され、その結果、MKN45/DDP細胞ではin vitroでDDP感受性が上昇した。フローサイトメトリーの結果、SIVA-1過剰発現は対照細胞に比べてアポトーシス細胞の割合を増加させることが示された。コロニー形成アッセイでは、SIVA-1 の過剰発現により細胞の増殖と増殖が有意に抑制されることが明らかになった。また、SIVA-1を過剰発現させることにより、MKN45/DDP細胞の遊走性および浸潤性がin vitroで抑制された。ウェスタンブロット解析の結果、SIVA-1はp53、p73およびp14ARFの発現量を増加させ、Bcl-2、MDM2およびBcl-xLの発現量を減少させることが示された。つまり、SIVA-1はp53、p73、p14ARFの発現を増加させ、Bcl-2、MDM2、Bcl-xLの発現を減少させ、胃癌細胞におけるシスプラチン抵抗性を逆転させることが示唆された。

SIVA-1 plays a critical role in the induction of apoptosis in a number of different cell lines and participates in the mechanism of cisplatin (DDP)-mediated antitumor effects. However, the involvement of SIVA-1 in cisplatin resistance in gastric carcinoma has not been revealed. To explore the effect of SIVA-1 on DDP resistance, a recombinant pGV358-GFP-SIVA-1 lentiviral vector was constructed and transfected into human cisplatin-resistant MKN45/DDP gastric cancer cells. Subsequently, stable SIVA-1 overexpression was established in MKN45/DDP cells, which resulted in increased DDP sensitivity in MKN45/DDP cells in vitro. Flow cytometry demonstrated that SIVA-1 overexpression increased the percentage of apoptotic cells compared to that in the control. The colony formation assay clearly revealed that cell growth and proliferation were significantly suppressed following SIVA-1 overexpression. In addition, overexpression of SIVA-1 inhibited the migratory and invasive potential of MKN45/DDP cells in vitro. Western blot analysis indicated that SIVA-1 increased the expression levels of p53, p73, and p14ARF, whereas it reduced Bcl-2, MDM2, and Bcl-xL expression. In short, SIVA-1 upregulated the protein expression of p53, p73, and p14ARF and decreased that of Bcl-2, MDM2, and Bcl-xL in vitro and subsequently reversed cisplatin resistance in gastric cancer cells, suggesting that SIVA-1 serves as a valuable potential target for attenuating chemotherapy resistance.