金ナノ粒子をレポーターとした PCR 産物の裸眼検出のためのラテラルフロージェノクロマトグラフィーストリップ

Lateral Flow Genochromatographic Strip for Naked-Eye Detection of PCR Products with Gold Nanoparticles as a Reporter.

• Nazari-Vanani R
• Tondro G H
• Dehdari Vais R
• Haghkhah M
• Heli H
• Sattarahmady N

抄録

背景:

(MTB)はヒトの結核(TB)を引き起こす病原体であり、結核は莫大な社会的・経済的混乱を引き起こします。ラテラルフローテストストリップ（LFTS）は、安価で持ち運び可能な使い捨ての迅速で使いやすい分析ツールである。

Background: (MTB) is a pathogen causing tuberculosis (TB) in human, and TB can cause enormous social and economic disruptions. Lateral flow test strips (LFTSs) are inexpensive, portable, disposable, rapid, and easy-to-use analytical tools.

目的:

MTBの検出用にLFTSを作製した。ＭＴＢ Ｈ３７Ｒｖに対する新規特異的プローブを用いて、ＩＳ６１１０配列遺伝子に基づいてＬＦＴＳを作製し、ポリデオキシアデニン（ｄＡ）で尾部を形成した。

Objective: LFTSs were prepared for the detection of MTB. LFTSs were fabricated using a new specific probe for MTB H37Rv, based on IS6110 sequence gene, and tailed with poly deoxyadenine (dA).

材料と方法:

本実験では、テストゾーンとコントロールゾーンを作成するために、ニトロセロロース膜上にストレプトアビジン（STP）と150merのdAを点在させた。金ナノ粒子（ＧＮＰ）をポリデオキシチミジン配列でコンジュゲートし、コンジュゲートパッド上に配置した。サンプルパッドとコンジュゲートパッドの浸漬緩衝液、ランニング溶液、GNPs-S-dT150とSTPの溶液の組成を紹介した。ＭＴＢおよび臨床サンプル中のＤＮＡゲノムをＰＣＲで増幅し、ＬＦＴＳで検出した。測定中、サンプルは2段階でハイブリダイズされ、検出パッド上に陽性サンプルは2本、陰性サンプルは1本の赤い線が出るようにコンジュゲートパッド上に置かれた。

Material and Methods: In this experimental study, to create test and control zones, streptavidin (STP) and a 150-mer dA were dotted on a nitrocellolose membrane. Gold nanoparticles (GNPs) were conjugated with poly deoxythymidine sequence and placed on the conjugate pad. The composition of immersion buffers for sample pad and conjugate pad, running solution, solutions of GNPs-S-dT150 and STP were introduced. DNA genome of MTB and in clinical samples was amplified with PCR, and then detected by the LFTSs. During the assay, samples were firstly hybridized in two steps and then placed on a conjugate pad in a manner that positive and negative samples provided two and one red lines, respectively, on the detection pad.

結果:

ビオチン化プライマーを用いたPCR反応後、特異的MTBプローブ-dA70-100とのハイブリダイゼーション処理を10分、ストリップ上でのランニング処理を5分以内に行った。

Results: After PCR reaction with biotinylated primer, hybridization process with specific MTB probe-dA70-100 toke 10 min, and running process on the strip was performed within 5 min.

結論:

私たちは、LFTSが特定の細菌株を他の細菌株と区別できることを示しました。また、LFTSは他の病原性ゲノムを検出するために再設計することも可能である。

Conclusion: We showed that LFTS can discriminate a particular bacteria strain from others. The LFTSs can be redesigned for detection of other pathogenic genomes.

Copyright: © Journal of Biomedical Physics and Engineering.