miR-335-5pはCCNB2を標的にして肺腺癌の細胞周期と転移を制御している

miR-335-5p Regulates Cell Cycle and Metastasis in Lung Adenocarcinoma by Targeting CCNB2.

• Xiyong Wang
• Huaiqing Xiao
• Dongqiang Wu
• Dongliang Zhang
• Zhihao Zhang

抄録

研究の背景:

サイクリン障害が腫瘍の発生を促進することが多くの研究で明らかにされている。本研究では、肺腺癌(LUAD)におけるCCNB2の生物学的機能と分子機構を明らかにすることを目的としています。

Background: Lots of studies have shown that cyclin disorders can promote tumor development. This study aims to investigate the biological function and molecular mechanism of CCNB2 in lung adenocarcinoma (LUAD).

方法:

LUADデータはGEOデータベースとTCGA-LUADデータベースからダウンロードした。差異のあるmiRNAやmRNAを見つけるために差分解析を行い、標的となりうるmRNAへのアクセスのために標的予測を行った。ヒトLUAD細胞株A-427、A549、Calu-3、PC-9、ヒト気管支上皮細胞株BEAS-2Bを用いて、qRT-PCRとウエスタンブロットにより遺伝子発現レベルを検出した。PC-9細胞株の細胞増殖、転移および細胞周期の変化を検出するために、MTT、コロニー形成、Transwellおよびフローサイトメトリーアッセイを用いた。デュアルルシフェラーゼレポーター遺伝子を用いて、標的miRNAとmRNAの標的結合関係を検出した。

Methods: LUAD data were downloaded from GEO database and TCGA-LUAD database. Differential analysis was conducted to find the differentially expressed miRNAs and mRNAs, while targeted prediction was done for the access of potential target mRNAs. Gene expression level was detected by qRT-PCR and Western blot in human LUAD cell lines A-427, A549, Calu-3, PC-9 and human bronchial epithelial cell line BEAS-2B. MTT, colony formation, Transwell and flow cytometry assays were used to detect cell proliferation, metastasis, and cell cycle changes of PC-9 cell line. The dual-luciferase reporter gene was used to detect the targeted binding relationship of the target miRNA and mRNA.

結果:

CCNB2は高発現しており、LUAD患者の予後不良を示すバイオマーカーとして機能していた。また、CCNB2をサイレンシングすることでLUAD細胞の増殖、遊走、浸潤を抑制し、G0/G1期の細胞周期を阻害することを細胞機能実験で確認した。また、制御機構については、miR-335-5pがCCNB2の3'-UTRと結合する部位を有していることを明らかにし、miR-335-5pがCCNB2の制御発現を標的としていることを示唆した。その後の細胞機能試験では、miR-335-5pの過剰発現が癌細胞の増殖と転移を抑制し、レスキュー実験では癌細胞の進行に対するCCNB2過剰発現の促進を逆転させることが確認された。

Results: CCNB2 was highly expressed and served as a biomarker indicating poor prognosis in LUAD patients. Cell function experiments confirmed the inhibitory effects of silencing CCNB2 on the proliferation, migration and invasion of LUAD cells and cell cycle was blocked in the G0/G1 phase. In addition, with regard to the regulatory mechanism, we demonstrated that miR-335-5p had binding sites with 3'-UTR of CCNB2, indicating that miR-335-5p could target the regulation expression of CCNB2. In subsequent cell function tests, overexpression of miR-335-5p inhibited the proliferation and metastasis of cancer cells, and the rescue experiments also verified that miR-335-5p could reverse the promotion of CCNB2 overexpression on the progress of cancer cells.

結論:

以上の結果から、miR-335-5pがCCNB2のダウンレギュレーションを標的にしてLUADの発生・発生を抑制できることが明らかになった。

Conclusion: In summary, our results revealed that miR-335-5p could target the down-regulation of CCNB2 to inhibit the occurrence and development of LUAD.

© 2020 Wang et al.