口腔扁平上皮癌細胞における接着、転移、血管新生、上皮-間葉系転移タンパク質に対するDSPPおよびMMP20サイレンシングの効果。

Effects of DSPP and MMP20 Silencing on Adhesion, Metastasis, Angiogenesis, and Epithelial-Mesenchymal Transition Proteins in Oral Squamous Cell Carcinoma Cells.

• Jaya Aseervatham
• Kalu U E Ogbureke

抄録

最近の報告では、口腔扁平上皮癌（OSCs）における象牙質シアルホスホプロテイン（DSPP）とそのパートナーであるマトリックスメタロプロテアーゼ20（MMP-20）の潜在的な腫瘍性の役割が強調されている。しかし、これらの役割のメカニズムはまだ十分には解明されていない。本研究では、口腔がん細胞の接着、血管新生、転移、上皮間葉転換（EMT）に関与する特定のタンパク質に対するDSPPとMMP20のサイレンシングの効果を調べることを目的とした。レンチウイルス媒介のshRNA導入により樹立されたOSC細胞株（OSC2）の安定株を用いて、DSPP、MMP20、およびDSPP-MMP20複合サイレンシングがMMP2、MMP9、インテグリンαに及ぼす影響を解析した。vβ3およびαvβ6、VEGF、カリケリン-4,-5,-8,-10、E-カドヘリン、N-カドヘリン、ビメンチン、met、src、カタツムリ、Twistに対する影響をウェスタンブロットにより解析した。その結果、MMP2、MMP9、インテグリンαvβ3、αvβ6、VEGF、カリケリン-4、-5、-8、-10、N-カドヘリン、ビメンチンmet、src、snail、twistの発現は、DSPPとMMP20のサイレンシングを受けた後、個別に、または組み合わせて、有意に減少した（<0.05）ことが示された。一方、E-カドヘリンの発現は有意に増加していることが確認された（＜0.05）。これらの結果は、OSC2細胞に対するDSPPおよびMMP20の腫瘍性効果が、浸潤、転移、血管新生、および上皮間葉転換（EMT）に関与する遺伝子のアップレギュレーションを介して媒介されていることを示唆している。

Recent reports highlight the potential tumorigenic role of Dentin Sialophosphoprotein (DSPP) and its cognate partner Matrix Metalloproteinase 20 (MMP-20) in Oral Squamous Cell Carcinomas (OSCCs). However, the function/mechanism of these roles is yet to be fully established. The present study aimed to investigate the effects of DSPP and MMP20 silencing on specific proteins involved in oral cancer cell adhesion, angiogenesis, metastasis, and epithelial-mesenchymal transition (EMT). Stable lines of DSPP/MMP20 silenced OSCC cell line (OSC2), previously established via lentiviral-mediated shRNA transduction, were analyzed for the effects of DSPP, MMP20, and combined DSPP-MMP20 silencing on MMP2, MMP9, integrins αvβ3 and αvβ6, VEGF, Kallikerin- 4,-5,-8,-10, E-cadherin, N-cadherin, Vimentin, met, src, snail, and Twist by Western blot. Results show a significant decrease ( < 0.05) in the expression of MMP2, MMP9, integrin αvβ3, αvβ6, VEGF, Kallikerins -4, -5, -8, -10, N-cadherin, vimentin met, src, snail and twist following DSPP and MMP20 silencing, individually and in combination. On the other hand, the expression of E-cadherin was found to be significantly increased ( < 0.05). These results suggest that the tumorigenic effect of DSPP and MMP20 on OSC2 cells is mediated via the upregulation of the genes involved in invasion, metastasis, angiogenesis, and epithelial-mesenchymal transition (EMT).