Knocking Out the Wall.遺伝子ターゲティングのための改訂版プロトコール

Knocking Out the Wall: Revised Protocols for Gene Targeting in Physcomitrella patens.

• Alison W Roberts
• Christos S Dimos
• Michael J Budziszek
• Chessa A Goss
• Virginia Lai
• Arielle M Chaves

抄録

コケ類のPhyscomitrella patensは、遺伝子ターゲティングが可能であることから、植物の遺伝子機能を調べるモデルとして確立されてきた。P. patens細胞壁の化学組成は維管束植物のそれに類似しており、P. patensゲノムからの糖転移酵素配列の系統解析により、細胞壁生合成酵素をコードする遺伝子が同定されており、細胞壁多糖類およびそれを合成する酵素の進化を調べるための基礎を提供している。この章で説明されているプロトコルは、ベクターの構築と培養の維持からプロトプラストの形質転換とその結果として得られる形質転換された系統の遺伝子型と表現型の分析に至るまで、P. patensにおける標的遺伝子ノックアウトのための方法を提供します。

The moss Physcomitrella patens has become established as a model for investigating plant gene function due to the feasibility of gene targeting. The chemical composition of the P. patens cell wall is similar to that of vascular plants and phylogenetic analyses of glycosyltransferase sequences from the P. patens genome have identified genes that putatively encode cell wall biosynthetic enzymes, providing a basis for investigating the evolution of cell wall polysaccharides and the enzymes that synthesize them. The protocols described in this chapter provide methods for targeted gene knockout in P. patens, from constructing vectors and maintaining cultures to transforming protoplasts and analysing the genotypes and phenotypes of the resulting transformed lines.