周期的電界-フロー分画を用いた差動遠心によって分離されたヒト神経膠芽腫と正常血漿由来の細胞外小胞の特性評価

Characterization of Human Glioblastoma versus Normal Plasma-Derived Extracellular Vesicles Preisolated by Differential Centrifugation Using Cyclical Electrical Field-Flow Fractionation.

• Farhad Shiri
• Bruce K Gale
• Himanshu Sant
• Gina T Bardi
• Joshua L Hood
• Kevin E Petersen

抄録

細胞外小胞(sEV、以前は「エクソソーム」と呼ばれていた)の特性は多く知られているが、電気泳動移動度(EM)の測定値には広い範囲の値が報告されている。本論文では、差動遠心分離により分離したU87グリオブラストーマ細胞由来および血漿由来のsEVおよび中サイズEV（mEV、通称「オンコソーム」）のEMに対する希釈の効果を初めて報告する。さらに、sEVとmEVのEMに及ぼす再塩析の影響を評価した。U87 sEV及びU87 mEVのEMは、塩濃度が初期塩濃度の0.005%まで低下するにつれて増加した。しかし、プラズマsEV及びプラズマmEVについては、塩濃度が初期塩濃度の0.01%まで低下するにつれて電気泳動性が増加し、その後、塩濃度が初期塩濃度の0.005%まで低下すると初期値まで増加した。また、U87および血漿中のsEVおよびmEVについては、粒子の濃度が変化しても、塩濃度を初期値と同じにした場合のEMはほぼ一定であった。このことは、ＥＶｓのＥＭが緩衝液の塩濃度の関数でしかなく、粒子の濃度に依存しないことを示している。ｓＥＶｓとｍＥＶｓを初めて周期的なＥｌＦＦＦを用いて分離した。その結果、ElFFFはEVを分画することができ、印加AC電圧を変化させた（増加させた）ときの保持時間に三日月型の傾向が見られた。

Although many properties for small extracellular vesicles (sEVs, formerly termed "exosomes") isolated at ∼100 000 are known, a wide range of values are reported for their electrophoretic mobility (EM) measurements. This paper reports for the first time the effect of dilution on the EM of U87 glioblastoma cell-derived and plasma-derived sEVs and medium size EVs (mEVs, commonly termed "oncosomes") preisolated by differential centrifugation. Furthermore, the effect of resalting on the EM of sEVs and mEVs was evaluated. The EM of U87 sEVs and U87 mEVs showed an increase as the salt concentration decreased to 0.005% of the initial salt concentration. However, for the plasma sEVs and plasma mEVs, the electrophoretic mobility increased as the salt concentration decreased to 0.01% of the initial salt concentration and then increased to its initial value when the salt concentration decreased to 0.005% of the initial salt concentration. For both U87 and plasma sEVs and mEVs, the EM remained almost constant when the concentration of the particles changed and the salt concentration was kept the same as its initial value. This indicates that the EM of EVs is only a function of the salt concentration of the buffer and is independent of the concentration of the particles. The sEVs and mEVs were separated with cyclical ElFFF for the first time. The results indicate that ElFFF was able to fractionate the EVs, and a crescent-shaped trend was found for the retention time when the applied AC voltage was altered (increased).