バレット発がんにおけるp16メチル化の定量的解析

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Ann Diagn Pathol.2020 Jun;47:151554. S1092-9134(20)30097-6. doi: 10.1016/j.anndiagpath.2020.151554.Epub 2020-06-17.

バレット発がんにおけるp16メチル化の定量的解析

Quantitative analysis of p16 methylation in Barrett's carcinogenesis.

E Chueca
A Valero
C Hördnler
A Puertas
P Carrera
M A García-González
M Strunk
A Lanas
E Piazuelo

PMID: 32570024 DOI: 10.1016/j.anndiagpath.2020.151554.

抄録

Barrett 癌発生における p16 のハイパーメチル化は、試料の不均一性を考慮しない研究で評価されており、正確な定量的データ（CpG メチル化の割合）ではなく、定性的なデータ（メチル化/非メチル化）が得られていた。我々は、バレット腫瘍形成のすべての段階を代表する純粋なサンプルにおけるp16のメチル化の程度を測定し、メチル化分析におけるサンプルの不均一性の影響を評価することを目的とした。

p16 hypermethylation in Barrett's carcinogenesis has been evaluated in studies which did not take into account sample heterogeneity and yielded qualitative (methylated/unmethylated) instead of accurate quantitative (percentage of CpG methylation) data. We aimed to measure the degree of p16 methylation in pure samples representing all the steps of Barrett's tumorogenesis and to evaluate the influence of sample heterogeneity in methylation analysis.

方法:

77のパラフィン包埋ヒト食道サンプルを分析した。組織学的分類は、2人の病理医によって、異形成陰性、異形成不定、低悪性度異形成、高悪性度異形成、腺癌の順に設定された。p16のメチル化はパイロシークエンシングによって定量化した。サンプル全体の隣接するセクションも、メチル化データを比較するために分析した。

METHODS: 77 paraffin-embedded human esophageal samples were analyzed. Histological grading was established by two pathologists in: negative for dysplasia, indefinite for dysplasia, low-grade dysplasia, high-grade dysplasia and adenocarcinoma. Areas of interest were selected by laser-capture microdissection. p16 methylation was quantified by pyrosequencing. An adjacent section of the whole sample was also analyzed to compare methylation data.

結果:

マイクロダイセクション後、扁平上皮15サンプル、非異形成Barrett食道36サンプル、異形成不定3サンプル、低悪性度異形成24サンプル、高悪性度異形成4サンプル、腺癌12サンプルを得た。扁平上皮が最もメチル化率が低かった。異形成の陰性/不定では6%(IQR 5-11)対11%(7-39.50)、p<0.01、低悪性度異形成では10.60%(6-24)、p<0.05、高悪性度異形成/腺癌では44.50%(9-66.75)、p<0.01であった。この後者のグループはまた、低悪性度異形成の有無にかかわらず、Barrett上皮よりも高いメチル化率を示した（p<0.05）。

RESULTS: After microdissection, we obtained 15 samples of squamous epithelium, 36 non-dysplastic Barrett's esophagus, 3 indefinite for dysplasia, 24 low-grade dysplasia, 4 high-grade dysplasia and 12 adenocarcinoma. Squamous epithelium showed the lowest methylation rates: 6% (IQR 5-11) vs. 11%(7-39.50) in negative/indefinite for dysplasia, p<0.01; 10.60%(6-24) in low-grade dysplasia, p<0.05; and 44.50%(9-66.75) in high-grade dysplasia/adenocarcinoma, p<0.01. This latter group also exhibited higher methylation rates than Barrett's epithelium with and without low-grade dysplasia (p<0.05). p16 methylation rates of microdissected and non-microdissected samples did not correlate unless the considered histological alteration comprised >71% of the sample.

結論:

p16 メチル化率はサンプルの不均一性に大きく影響されるため、その違いを検出するためにはサンプルの選択が重要である。

CONCLUSIONS: p16 methylation is an early event in Barrett's carcinogenesis which increases with the severity of histological alteration. p16 methylation rates are profoundly influenced by sample heterogeneity, so selection of samples is crucial in order to detect differences.