SNHG20のノックダウンは、miR-2467-3p/E2F3を制御することで、増殖・移行・浸潤を抑制し、アポトーシスを誘導することで、非小細胞肺癌の発生を抑制することが明らかになった

Knockdown SNHG20 Suppresses Nonsmall Cell Lung Cancer Development by Repressing Proliferation, Migration and Invasion, and Inducing Apoptosis by Regulating miR-2467-3p/E2F3.

• Hang Chen
• Xin Tan
• Yi Ding

抄録

肺がんは世界で最も一般的な悪性腫瘍の一つであった。中国では、肺がんは都市人口の悪性腫瘍死亡率の第一位となっており、非小細胞肺がん（NSCLC）は全肺がんの80％以上を占め、5年生存率が悪い。長鎖非コードRNA（lncRNA）小核球RNA宿主遺伝子20（SNHG20）がNSCLCと関連していることが報告されていたが、NSCLCにおけるSNHG20の制御機構については、さらなる研究が必要であった。 NSCLC の組織および細胞における SNHG20 および E2F 転写因子 3 (E2F3) の発現量をリアルタイム定量ポリメラーゼ連鎖反応 (RT-qPCR) およびウェスタンブロットアッセイで測定した。3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニル-2H-テトラゾール-3-ウムブロミド(MTT)を用いて細胞の増殖を検出し、フローサイトメトリー分析を用いて細胞のアポトーシスをモニターした。また、細胞の移動性と浸潤性をトランスウェルアッセイで評価した。また、miR-2467-3p、SNHG20、E2F3 の関連性をデュアルルシフェラーゼレポーターアッセイにより解析した。また、関連するタンパク質の発現量はウエスタンブロットにより決定した。 その結果、SNHG20とE2F3はNSCLC組織と細胞株で発現量が増加していることがわかった。また、SNHG20またはE2F3サイレンシングをノックダウンすることで、NSCLC細胞株の増殖、運動性、アポトーシスを抑制できることが機械的実験で明らかになった。また、E2F3 の発現を回復させると、SNHG20 サイレンシングによって引き起こされた増殖、運動性の低下、アポトーシスの促進を効果的に逆転させることができた。また、SNHG20はプロテインキナーゼB（AKT）シグナル伝達経路を活性化し、miR-2467-3pを標的としてE2F3の発現量を増加させた。 SNHG20は、AKTシグナル伝達経路を仲介し、miR-2467-3pを標的にしてE2F3の発現を上昇させることで、NSCLCの発生に寄与していることがわかった。

Lung cancer was one of the most common malignant tumors around the world. In China, lung cancer has become the leading reason of malignant tumors-related mortality in urban population, whereas nonsmall cell lung cancer (NSCLC) occupied at least 80% of all lung cancers with poor 5-year survival rate. It had been reported that long noncoding RNA (lncRNA) small nucleolar RNA host gene 20 (SNHG20) was associated with NSCLC, but the regulatory mechanisms of SNHG20 in NSCLC needed further investigation. The abundances of SNHG20 and E2F transcription factor 3 (E2F3) in NSCLC tissues and cells were measured with real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) and western blot assays. 3-(4, 5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl-2H-tetrazol-3-ium bromide (MTT) was applied to detect cells proliferation, whereas flow cytometry analysis was used to monitor cell apoptosis. In addition, cells capabilities of migratory and invasion were assessed with transwell assay. The association among miR-2467-3p, SNHG20, and E2F3 was analyzed by dual-luciferase reporter assay. The related protein expression levels were determined by western blot. SNHG20 and E2F3 was upregulation in NSCLC tissues and cell lines. Mechanical experiment displayed that knockdown of SNHG20 or E2F3 silencing could inhibit proliferation, motility, and improve apoptosis in NSCLC cell lines. Restored expression of E2F3 could effectively reverse reduction of proliferation, motility, and promotion of apoptosis caused by SNHG20 silencing in NSCLC cells. Besides, SNHG20 activated protein kinase B (AKT) signaling pathway and increased E2F3 level in NSCLC cells through targeting miR-2467-3p. SNHG20 contributed to NSCLC development through mediating AKT signaling pathway and sponging miR-2467-3p to elevate E2F3 expression in NSCLC cells.