EpiAirway™における有機カチオン輸送体（OCTs）、正常ヒト気管支上皮の細胞モデル

Organic Cation Transporters (OCTs) in EpiAirway™, A Cellular Model of Normal Human Bronchial Epithelium.

• Amelia Barilli
• Rossana Visigalli
• Francesca Ferrari
• Maria Di Lascia
• Benedetta Riccardi
• Paola Puccini
• Valeria Dall'Asta
• Bianca Maria Rotoli

抄録

有機カチオン輸送体(OCT)と新規有機カチオン輸送体(OCTN)は、腸や腎臓での薬物輸送を担っており、肺では、OCTが吸入された薬物の輸送を仲介しているが、気道でのその生理的役割はまだ十分に理解されていない。ヒト気道におけるOCTs/OCTNsに関する研究は、ほとんどが不死細胞または形質転換細胞株を用いて行われています。比較のためにCalu-3単分子膜を使用した。OCTsの活性は、単層の先端側と基底側での1-メチル-4-フェニルピリジニウム（MPP）の取り込みとウエスタンブロット分析を介してタンパク質の発現を測定することによって評価した。OCTsおよびOCTNsの発現は、アミノ酸トランスポーターB（ATB）トランスポーターの発現とともに、定量的ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）を用いてmRNA分子数を測定することにより決定した。また、トランスポーターと気管支拡張剤との相互作用も評価した。結果は、後者では、OCTは、彼らが気管支拡張剤イプラトロピウムと相互作用する基底側膜上でのみ活性であるので、Calu-3細胞とエピエアウェイ™の間の有意な違いを強調しています。OCTsの活性は、先端側で検出されません。そこでは、最も豊富なキャリアは、代わりに、/ATBは、このように潜在的に肺の薬物送達に責任がある有機カチオン輸送体の間でリストすることができます。

Organic cation transporters (OCTs) and novel organic cation transporters (OCTNs) are responsible for drug delivery in the intestine and kidney; in the lung, OCTs mediate inhaled drugs' transport, although their physiological role in airways remains poorly understood. The studies addressing OCTs/OCTNs in human airways were mostly performed in immortal or transformed cell lines; here, we studied OCTs in EpiAirway™, a recently developed in vitro model of normal bronchial epithelium. Calu-3 monolayers were used for comparison. The activity of OCTs was evaluated by measuring the uptake of 1-methyl-4-phenylpyridinium (MPP) at the apical and basolateral side of monolayers and protein expression through Western Blot analysis. OCTs and OCTNs expression, along with that of Amino acid Transporter B (ATB)transporter, was determined by measuring the number of mRNA molecules through quantitative Polymerase Chain Reaction (qPCR). The interaction of the transporters with bronchodilators was also assessed. Results highlight significant differences between Calu-3 cells and EpiAirway™, since, in the latter, OCTs are active only on the basolateral membrane where they interact with the bronchodilator ipratropium. No activity of OCTs is detectable at the apical side; there, the most abundant carrier is, instead, /ATB, that can thus be potentially listed among organic cation transporters responsible for drug delivery in the lung.