正常なヒトのエンシスには、制御性と誘導性のあるIL-17AおよびTNF発現を有する従来型のCD4+およびCD8+ T細胞が存在している

Normal human enthesis harbours conventional CD4+ and CD8+ T cells with regulatory features and inducible IL-17A and TNF expression.

• Abdulla Watad
• Hannah Rowe
• Tobias Russell
• Qiao Zhou
• Lisa K Anderson
• Almas Khan
• Robert Dunsmuir
• Peter Loughenbury
• Vishal Borse
• Abhay Rao
• Peter A Millner
• Nicola Luigi Bragazzi
• Howard Amital
• Richard Cuhtbert
• Miriam Wittmann
• Kassem Sharif
• Tony Kenna
• Matthew A Brown
• Darren Newton
• Charlie Bridgewood
• Dennis G McGonagle

抄録

背景:

ヒトのエンシンセシスの従来型T細胞の特徴は乏しい。

BACKGROUND: The human enthesis conventional T cells are poorly characterised.

目的:

ヒトのエンシスにおける従来型T細胞のバイオロジーを研究する。

OBJECTIVES: To study the biology of the conventional T cells in human enthesis.

方法:

CD4+およびCD8+ T細胞は、インターロイキン(IL)-17Aおよび腫瘍壊死因子(TNF)レベルを決定するために、抗CD3/CD28ビーズ刺激後の免疫蛍光、サイトメトリー、バルクRNAseqおよび定量的リアルタイムPCRを使用して、25のエンシンセシスサンプルで調査されました。T細胞受容体（TCR）レパートリーを特徴づけ、TCR3データベースを用いて推定されるT細胞反応性の検索を行った。レチノイン酸受容体関連オーファン核受容体γt阻害薬（RORγti）、メトトレキサート、ホスホジエステラーゼ4型阻害薬（PDE4i）による薬理学的拮抗作用の影響を検討した。

METHODS: CD4+ and CD8+ T cells were investigated in 25 enthesis samples using immunofluorescence, cytometrically, bulk RNAseq and quantitative real-time PCR following anti-CD3/CD28 bead stimulation to determine interleukin (IL)-17A and tumour necrosis factor (TNF) levels. T-cell receptor (TCR) repertoires were characterised and a search for putative T-cell reactivity was carried out using TCR3 database. The impact of pharmacological antagonism with retinoic acid receptor-related orphan nuclear receptor gamma t inhibitor (RORγti), methotrexate and phosphodiesterase type 4 inhibitor (PDE4i) was investigated.

結果:

免疫蛍光およびサイトメトリーは、常駐記憶表現型（CD69+/CD45RA-）と組織常駐遺伝子転写産物（NR4A1/AhRが高く、KLF2/T-bet転写産物が低い）を持つエンセシール常駐型CD4+およびCD8+ T細胞を示唆した。CD4+およびCD8+ T細胞は、末梢血T細胞と比較して、IL-10およびTGF-βを含む免疫調節遺伝子の発現の増加を示し、CD8+ T細胞は、CD4+ T細胞と一致する高いCD103、CD49aおよび低いSIPR1転写物を有していた。刺激後、CD4+ T細胞はCD8+ T細胞よりも多くのTNFを産生し、IL-17AはCD4+ T細胞によって排他的に産生された。RNAseqは、サイトメガロウイルスとインフルエンザAウイルスの両方がレジデントT細胞のクローンタイプに反応することを示唆していた。CD4+ T細胞からのTNFおよびIL-17A産生はPDE4iによって効果的に阻害されたが、RORγtiはIL-17A分泌を減少させるだけであった。

RESULTS: Immunofluorescence and cytometry suggested entheseal resident CD4+ and CD8+ T cells with a resident memory phenotype (CD69+/CD45RA-) and tissue residency gene transcripts (higher NR4A1/AhR and lower KLF2/T-bet transcripts). Both CD4+ and CD8+ T cells showed increased expression of immunomodulatory genes including IL-10 and TGF-β compared with peripheral blood T cells with entheseal CD8+ T cells having higher CD103, CD49a and lower SIPR1 transcript that matched CD4+ T cells. Following stimulation, CD4+ T cells produced more TNF than CD8+ T cells and IL-17A was produced exclusively by CD4+ T cells. RNAseq suggested both Cytomegalovirus and influenza A virus entheseal resident T-cell clonotype reactivity. TNF and IL-17A production from CD4+ T cells was effectively inhibited by PDE4i, while RORγti only reduced IL-17A secretion.

結論:

健康なヒトCD4+およびCD8+ Tcellsは調節性の特徴を示し、CD8+ Tcellsは組織の居住性を示唆する転写物をより高いレベルで発現しており、抗ウイルス反応性を示すと予測される。誘導性IL-17AおよびTNF産生はin vitroで強力に阻害することができる。

CONCLUSIONS: Healthy human entheseal CD4+ and CD8+ T cells exhibit regulatory characteristics and are predicted to exhibit antiviral reactivity with CD8+ T cells expressing higher levels of transcripts suggestive of tissue residency. Inducible IL-17A and TNF production can be robustly inhibited in vitro.

© Author(s) (or their employer(s)) 2020. Re-use permitted under CC BY-NC. No commercial re-use. See rights and permissions. Published by BMJ.