ステロイドのLC/ESI-MS/MSアッセイにおけるスループット向上のための複数の類似試薬を用いた誘導体化によるサンプルの多重化。血漿17α-ヒドロキシプロゲステロンを例に挙げています

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J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci..2020 Jun;1146:122117. S1570-0232(20)30272-5. doi: 10.1016/j.jchromb.2020.122117.Epub 2020-04-15.

ステロイドのLC/ESI-MS/MSアッセイにおけるスループット向上のための複数の類似試薬を用いた誘導体化によるサンプルの多重化。血漿17α-ヒドロキシプロゲステロンを例に挙げています

Sample-multiplexing by derivatization using multiple analogous reagents for enhancing throughput in LC/ESI-MS/MS assay of steroids: Plasma 17α-hydroxyprogesterone as an example.

Miki Kamemura
Mai Yokota
Shoujiro Ogawa
Takahiro Sugiura
Tatsuya Higashi

PMID: 32335501 DOI: 10.1016/j.jchromb.2020.122117.

抄録

生体液中のステロイドの測定は、多くの疾患の診断や治療に重要な役割を果たしています。液体クロマトグラフィー/エレクトロスプレーイオン化-タンデム質量分析法(LC/ESI-MS/MS)は、ステロイド分析のための高い特異性と精度を持っていますが、分析スループットが低く、臨床現場では大きな問題となる可能性があります。この問題に対する有望な解決策の一つは、同一注射でのサンプルの多重化である。本研究では、ステロイドのLC/ESI-MS/MSアッセイのスループットを向上させるために、複数の類似試薬を用いた誘導体化によるサンプル多重化の有用性を評価しました。21-ヒドロキシラーゼ欠損症の診断マーカーである血漿17α-ヒドロキシプロゲステロン(17OHP)をモデル分析物として選択した。4つの血漿サンプル（各20μL）を、4つの異なる類似のジラード型試薬のうちの1つで別々に誘導体化し、組み合わせて、一緒にLC/ESI-MS/MSに注入した。この方法により、1回のLCラン内で4つの血漿サンプルを分析することができました。開発した方法は、感度(定量下限0.5ng/mL)、精度(測定範囲内RSD≦4.0%、測定範囲内RSD≦3.5%)、精度(97.6-106.7%)が良好で、マトリックスの影響を無視できるほどの精度で、総測定時間を大幅に短縮することができた(32検体で約2/5、従来法と比較して)。開発した方法は、臍帯血漿中の17OHPの定量に十分な適用性を有していた。

The measurements of steroids in biological fluids are of importance for the diagnosis and treatment of many diseases. Liquid chromatography/electrospray ionization-tandem mass spectrometry (LC/ESI-MS/MS) has a high specificity and accuracy for the steroid analysis, whereas it has a lower analysis throughput, which could become a big issue in clinical practice. One of the promising solutions to this issue is the multiplexing of samples in the same injection. In this study, the utility of the sample-multiplexing by the derivatization using multiple analogous reagents was evaluated for enhancing the throughput of the LC/ESI-MS/MS assays of steroids. The plasma 17α-hydroxyprogesterone (17OHP), which is a diagnostic marker for the 21-hydroxylase deficiency, was chosen as the model analyte. The four plasma samples (20 μL each) were separately derivatized with one of four different analogous Girard-type reagents, combined, then injected together into the LC/ESI-MS/MS. By this method, four plasma samples could be analyzed within a single LC run. The developed method could significantly reduce the total LC run time (about 2/5 for 32 samples, compared with the conventional method) with a satisfactory sensitivity (lower limit of quantification 0.5 ng/mL), precision (intra- and inter-assay RSDs ≤ 4.0% and ≤ 3.5%, respectively) and accuracy (97.6-106.7%), and negligible matrix effect. The developed method had a satisfactory applicability for the quantification of 17OHP in the cord plasma samples.