PA28γを安定に過剰発現させる口腔扁平上皮癌細胞株の構築

[Construction of an oral squamous cell carcinoma cell line for stable PA28γ overexpression].

• Chuan Xin
• Jiong-Ke Wang
• Jing Li
• Xin Zeng

抄録

目的:

PA28γ過剰発現細胞株を構築し、口腔扁平上皮癌（OSCC）細胞株に感染させた後の効果を決定する。

OBJECTIVE: To construct a PA28γ overexpression cell line and determine its effects after infecting an oral squa-mous cell carcinoma (OSCC) cell line.

方法:

pLOV.CMV.cherry.2A.EF1a.PuroRレンチウイルスベクターにポリメラーゼ連鎖反応（PCR）によりPA28γ遺伝子をクローニングし、PCRおよびDNAシークエンシングアラインメント解析により同定した。次に、293T細胞を用いてウイルス性疾患をパッケージ化した。感染したOSCC細胞を用いて、安定したPA28γ過剰発現を有する細胞株を構築した。最後に、OSCC細胞株におけるPA28γの発現レベルをウエスタンブロットにより検出した。

METHODS: The PA28γ gene was cloned into the pLOV.CMV.cherry.2A.EF1a.PuroR lentiviral vector by polymerase chain reaction (PCR), and PCR and DNA sequencing alignment analysis were used for identification. Then, 293T cells were used to package viral diseases. Infected OSCC cells were used to construct a cell line with stable PA28γ overexpression. Finally, the level of PA28γ expression in the OSCC cell line was detected through Western blot.

結果:

PA28γ組換えレンチウイルスベクターの構築に成功したことをDNA配列決定により確認した。免疫蛍光の結果、PA28γ過剰発現レンチウイルスはOSCC細胞への感染に成功し、チェリーレッドの蛍光を示した。ウェスタンブロットの結果、PA28γを安定に過剰発現させた細胞は、PA28γの発現が有意に増加していることが確認された。

RESULTS: The successful construction of PA28γ recombinant lentiviral vectors was confirmed by DNA sequencing. The results of immunofluorescence showed that the PA28γ overexpression lentivirus successfully infected the OSCC cells and showed cherry red fluorescence. The results of Western blot demonstrated that the constructed cells with stable PA28γ overexpression significantly increased the expression of PA28γ.

結論:

PA28γを過剰発現させたレンチウイルスベクターは、OSCC細胞においてPA28γのタンパク質発現を有意に増加させることができる。我々は、安定したOSCC細胞株を提供し、OSCCにおけるPA28γの効果をさらに研究している。

CONCLUSIONS: The PA28γ overexpression lentiviral vector can significantly increase its protein expression in OSCC cells. We provide a stable OSCC cell line for further study on the effect of PA28γ in OSCC.

目的 构建蛋白酶体激活因子PA28γ过表达的口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞转稳株，?并验证其表过达PA28γ的效率率方法。 首先采用聚合酶链反应（PCR）克隆PA28γ基因至pLOV.ｃｍｖ.チェリー.2A.EF1a.PuroR慢病毒载体中，采用PCR和DNA测序比对分析进行鉴定；其次采用293T细胞包装病毒；然后采用病毒感染OSCC细胞构建PA28γ稳定过表达细胞株。利用免疫印迹技术检测OSCC细胞稳定株中PA28γ表达的水平。 结果测DNA序结。果显示成功构建PA28γ过表达慢病毒载体构建；荧光结果显示，PA28γ过表达慢病毒成功感染OSCC细胞，并呈现樱桃红色荧光；免疫印迹结果显表示，构建的PA28γ稳定过表达细胞显示著提高细胞中PA28γ表达水平。PA28γ过表达慢病毒载体能显著提高细胞中PA28γ蛋白表达水平，为进一步研究PA28γ对OSCC发生发展的影响及其机制提供了稳定的细胞转染载体。

目的 构建蛋白酶体激活因子PA28γ过表达的口腔鳞状细胞癌（OSCC）细胞稳转株，并验证其过表达PA28γ的效率。方法 首先采用聚合酶链反应（PCR）克隆PA28γ基因至pLOV.CMV.cherry.2A.EF1a.PuroR慢病毒载体中，采用PCR和DNA测序比对分析进行鉴定；其次采用293T细胞包装病毒；然后采用病毒感染OSCC细胞构建PA28γ稳定过表达细胞株。最后利用免疫印迹技术检测OSCC细胞稳转株中PA28γ表达的水平。结果 DNA测序结果显示成功构建PA28γ过表达慢病毒载体构建；荧光结果显示，PA28γ过表达慢病毒成功感染OSCC细胞，并呈现樱桃红色荧光；免疫印迹结果显示，构建的PA28γ稳定过表达细胞显著提高细胞中PA28γ表达水平。结论 PA28γ过表达慢病毒载体能显著提高细胞中PA28γ蛋白表达水平，为进一步研究PA28γ对OSCC发生发展的影响及其机制提供了稳定的细胞转染载体。.