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卵白から5大タンパク質を簡単かつ迅速に分離する方法。逐次抽出とMALDI-TOF-MSによる同定
An easy and rapid separation method for five major proteins from egg white: Successive extraction and MALDI-TOF-MS identification.
PMID: 31991252 DOI: 10.1016/j.foodchem.2020.126207.
抄録
卵白から5つの主要なタンパク質を連続的な抽出/沈殿プロトコールを用いて分離した。分離されたタンパク質の収量と純度を測定した。分離されたタンパク質はMALDI-TOF-MSによって確認され、CDスペクトルによって構造が特徴づけられた。リゾチームは、まずＦＰＣ３５００樹脂を用いて分離し、リゾチームを含まない卵白からオボムチンを分離した。得られたリゾチームおよびオボムチンを含まない卵白溶液に硫酸アンモニウムおよびクエン酸を添加し、オボトランスフェリンを沈殿させた。エタノールを用いて、得られた上清からオボムコイドとオバルブミンを分離した。分離されたタンパク質をさらに精製し、そのための最適な条件を示唆した。その結果、リゾチーム、オボトランスフェリン、オバルブミン、オボムコイドの純度は90％以上、収率は77％以上、オボムチンの純度は72％以上、収率は75％以上であった。本研究では、樹脂吸着法、pH調整法、塩/エタノール沈殿法、限外ろ過法を用いて、卵白中の主要な5つのタンパク質を連続的に分離した。
Five major proteins from egg white were separated using a successive extraction/precipitation protocol. The yield and purity of the separated proteins were measured. The separated proteins were confirmed by MALDI-TOF-MS, and their structures were characterized by CD spectrum. Lysozyme was first separated using FPC 3500 resin and then ovomucin from the lysozyme-free egg white. Ammonium sulfate and citric acid were added to the resulting lysozyme- and ovomucin-free egg white solution to precipitate ovotransferrin. Ovomucoid and ovalbumin were separated from the resulting supernatant using ethanol. The separated proteins were further purified and the optimal conditions for the further purifications were suggested. The purity and yield of lysozyme, ovotransferrin, ovalbumin, and ovomucoid were higher than 90% and 77%, while those of ovomucin were about 72% and 75%, respectively. This study separated five major proteins in egg white successively using resin adsorption, pH adjustment, salt/ethanol precipitation, and ultrafiltration.
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