Ephx2遺伝子欠失はアンジオテンシンII注入マウスのアセチルコリン誘発弛緩に影響を与える：一酸化窒素とCYP-エポキシゲナーゼの役割

Ephx2-gene deletion affects acetylcholine-induced relaxation in angiotensin-II infused mice: role of nitric oxide and CYP-epoxygenases.

• Ahmad Hanif
• Matthew L Edin
• Darryl C Zeldin
• Mohammed A Nayeem

抄録

以前に、我々は、可溶性エポキシドヒドロドライブヌルマウスにおいて、アデノシンA受容体がNOに依存しない弛緩を誘導することを示した(Nayeemら in Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 304:R23-R32, 2013)。現在、我々は、Ephx2遺伝子欠失が、AARに依存しないが、NOおよびCYP-エポキシゲナーゼに依存するアセチルコリン(Ach)誘発性弛緩に影響を与えるという仮説を立てている。Ephx2遺伝子欠損マウスの大動脈では、C57Bl/6マウスと比較して、sEH（97.1％、P<0.05）は認められなかったが、ミクロソームエポキシドヒドロラーゼ（mEH、37％、P<0.05）タンパク質は増加し、CYP2C29とCYP2Jタンパク質には変化は認められなかった（P>0.05）。Ach誘導応答を、ニトロ-L-アルギニンメチルエステル(L-NAME)NO阻害剤；10M)、N-(メチルスルホニル)-2-(2-プロピニルオキシ)-ベンゼンヘキサンアミド(MS-PPOH)（CYP-エポキシゲナーゼ阻害剤。10M）、14,15-エポキシーサ-5（Z）-エン酸（14,15-EEZE、エポキシーサトリエン酸アンタゴニスト；10M）、SCH-58261（AAR-アンタゴニスト；10M）、およびアンジオテンシン-II（Ang-II、10M）。Ephx2マウスでは、10M以外ではAch誘導弛緩はC57Bl/6マウスと差がなかった（92.75±2.41 vs. 76.12±3.34, P<0.05）。しかし、L-NAME(Ephx2: 23.74±3.76%、C57Bl/6: 11.61±2.82%)、MS-PPOH(Ephx2: 48.16。16±6.53％、C57Bl/6：52.27±7.47％）、14,15-EEZE（Ephx2：44.29±8.33％、C57Bl/6：39.27±7.47％）対非処理（P<0.05）であった。しかし、SCH-58261（Ephx2：68.75±11.41％、C57Bl/6：66.26±9.43％、P>0.05）では、無処置 vs. 非処置（P>0.05）ではブロックされなかった。興味深いことに、Ehx2マウスとC57Bl/6マウスでは、Ang-IIが弛緩を減少させることがわかった（58.80±7.81% vs. 45.92±7.76, P<0.05）。以上の結果から、Ephx2マウスのAch誘発弛緩はNOとCYP-エポキシゲナーゼに依存しているが、A ARには依存していないことが示唆され、Ephx2遺伝子欠損はAng-II導入マウスのAch誘発弛緩を減少させることが示唆された。

Previously, we showed that adenosine A receptor induces relaxation independent of NO in soluble epoxide hydrolase-null mice (Nayeem et al. in Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 304:R23-R32, 2013). Currently, we hypothesize that Ephx2-gene deletion affects acetylcholine (Ach)-induced relaxation which is independent of AAR but dependent on NO and CYP-epoxygenases. Ephx2 aortas showed a lack of sEH (97.1%, P < 0.05) but an increase in microsomal epoxide hydrolase (mEH, 37%, P < 0.05) proteins compared to C57Bl/6 mice, and no change in CYP2C29 and CYP2J protein (P > 0.05). Ach-induced response was tested with nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME) NO-inhibitor; 10 M), N-(methylsulfonyl)-2-(2-propynyloxy)-benzenehexanamide (MS-PPOH) (CYP-epoxygenase inhibitor; 10 M), 14,15-epoxyeicosa-5(Z)-enoic acid (14,15-EEZE, an epoxyeicosatrienoic acid-antagonist; 10 M), SCH-58261 (AAR-antagonist; 10 M), and angiotensin-II (Ang-II, 10 M). In Ephx2 mice, Ach-induced relaxation was not different from C57Bl/6 mice except at 10 M (92.75 ± 2.41 vs. 76.12 ± 3.34, P < 0.05). However, Ach-induced relaxation was inhibited with L-NAME (Ephx2: 23.74 ± 3.76% and C57Bl/6: 11.61 ± 2.82%), MS-PPOH (Ephx2: 48.16 ± 6.53% and C57Bl/6: 52.27 ± 7.47%), and 14,15-EEZE (Ephx2: 44.29 ± 8.33% and C57Bl/6: 39.27 ± 7.47%) vs. non-treated (P < 0.05). But, it did not block with SCH-58261 (Ephx2: 68.75 ± 11.41% and C57Bl/6: 66.26 ± 9.43%, P > 0.05) vs. non-treated (P > 0.05). Interestingly, Ang-II attenuates less relaxation in Ehx2 vs. C57Bl/6 mice (58.80 ± 7.81% vs. 45.92 ± 7.76, P < 0.05). Our data suggest that Ach-induced relaxation in Ephx2 mice depends on NO and CYP-epoxygenases but not on A AR, and Ephx2-gene deletion attenuates less Ach-induced relaxation in Ang-II-infused mice.