細胞膜のナノ構造は、熱誘発抗原回収によって変化する。膜状抗原の免疫細胞化学的検出のための可能性のある結果

Cell Membrane Nanostructure is Altered by Heat-Induced Antigen Retrieval: A Possible Consequence for Immunocytochemical Detection of Membranous Antigens.

• Katerina Cizkova
• Jakub Malohlava
• Zdenek Tauber

抄録

熱誘導抗原回収（HIAR）処理は、ホルマリン固定パラフィン包埋組織試料の抗原免疫検出能を向上させ、アルコール固定細胞学的試料の細胞内抗原検出能を向上させることができるが、免疫検出能、特に膜性抗原の検出能に悪影響を及ぼす可能性がある。我々は、メタノール/アセトン（M/A）または4％パラホルムアルデヒド（4％PFA）で固定したMCF7細胞の細胞表面形状の違い、および3つの異なる温度（60, 90, 120℃）でのHIAR処理による変化を原子間力顕微鏡を用いて調べた。さらに、上皮成長因子受容体(EGFR)、E-カドヘリン、CD9、CD24、CD44の5つの膜性抗原の免疫染色に及ぼす影響を調べた。その結果、試験した抗体の最適な免疫染色条件は一つではなかったが、表面の形状が染色の成功に重要な因子であることが明らかになった。一般的に、免疫染色に最適な条件は、HIAR処理を行わないM/A固定であったが、4％PFA固定細胞では、120℃でHIAR処理を行うことが最適であった。これらの条件は細胞表面のスキューネスに類似性を示した。また、免疫細胞化学的染色の成功と歪度パラメータの相関係数は0.8000であった。この結果は、細胞表面の谷、窪み、傷、ピットの存在は、細胞表面抗原の免疫検出には不利であることを示している。

Heat-induced antigen retrieval (HIAR) treatment improves the antigen immunodetection in formalin-fixed, paraffin-embedded tissue samples and it can also improve the detection of intracellular antigens in alcohol-fixed cytological samples, although it could deleteriously impact immunodetection, particularly that of membranous antigens. We examined the differences in cell surface topography on MCF7 cells fixed in methanol/acetone (M/A) or 4% paraformaldehyde (4% PFA), as well as the changes caused by HIAR treatment at three different temperatures (60, 90, and 120°C), using atomic force microscopy. Furthermore, the consequences for immunostaining of five membranous antigens [epidermal growth factor receptor (EGFR), E-cadherin, CD9, CD24, and CD44] were examined. Our results illustrate that while there was no one single optimal immunostaining condition for the tested antibodies, the surface topography could be an important factor in successful staining. Generally, the best conditions for successful immunostaining were M/A fixation with no HIAR treatment, whereas in 4% PFA-fixed cells, HIAR treatment at 120°C was optimal. These conditions showed similarity in cell surface skewness. A correlation factor between successful immunocytochemical staining and the skewness parameter was 0.8000. Our results indicate that the presence of valleys, depressions, scratches, and pits on the cell surface is unfavorable for the successful immunodetection of cell surface antigens.