使い捨てピペット抽出法と超高速液体クロマトグラフィー・タンデム質量分析法による脳脊髄液試料中のアナンダミドの定量

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J. Chromatogr. B Analyt. Technol. Biomed. Life Sci..2019 Nov;1130-1131:121809. S1570-0232(19)30687-7. doi: 10.1016/j.jchromb.2019.121809.Epub 2019-10-04.

使い捨てピペット抽出法と超高速液体クロマトグラフィー・タンデム質量分析法による脳脊髄液試料中のアナンダミドの定量

Determination of anandamide in cerebrospinal fluid samples by disposable pipette extraction and ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry.

Igor Gustavo de Carvalho Oliveira
Camila Marchioni
Maria Eugênia Costa Queiroz

PMID: 31669634 DOI: 10.1016/j.jchromb.2019.121809.

抄録

本研究では、脳脊髄液サンプル（CSF）中のエンドカンナビノイドアナンドアミド（AEA）を定量するために、使い捨てピペット抽出法（DPX-UHPLC-MS/MS）を用いた超高速液体クロマトグラフィータンデム質量分析法の開発と検証を行った。DPXのパラメータである収着平衡時間,試料量,ドロー・イジェクト回数,洗浄溶媒量,溶出溶媒量は実験計画法(DOE)により最適化された。ここで提案されたシンプルなDPXプロトコルは、CSFサンプルと有機溶媒の量を削減する必要がありました。DPX-UHPLC-MS/MS法は、0.10ngmL（LLOQ）から3.0ngmLまでの線形範囲、EPR値が-8.2%から9.6%まで変化する測定間および測定内精度、CV値が1.3%から14.8%（LLOQを除く）まで変化する測定間および測定内精度、および有意なマトリクス効果がないことを示した。革新的なDPX-UHPLC-MS/MS法は、パーキンソン病（PD）患者のCSFサンプル中のAEAの測定に成功しており、臨床試験での使用が期待されています。

This work describes the development and validation of an ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry method that uses disposable pipette extraction (DPX-UHPLC-MS/MS) to determine the endocannabinoid anandamide (AEA) in cerebrospinal fluid samples (CSF). The DPX parameters sorption equilibrium time, sample volume, number of draw-eject cycles, washing solvent volume, and elution solvent volume were optimized by design of experiments (DOE) techniques. The simple DPX protocol proposed herein required a reduced amount of CSF sample and organic solvent. The DPX-UHPLC-MS/MS method presented linear range from 0.10 ng mL (LLOQ) to 3.0 ng mL, inter- and intra-assay accuracy with EPR values varying from -8.2% to 9.6%, inter- and intra-assay precision with CV values ranging from 1.3% to 14.8% (except for the LLOQ), and no significant matrix effect. The innovative DPX-UHPLC-MS/MS method was successfully applied to determine AEA in CSF samples from Parkinson's disease (PD) patients and should therefore be used in clinical studies.