Rv3084は機能性エステラーゼをコードし、プロ炎症性サイトカインを抑制する

[ Rv3084 Encodes Functional Esterase and Suppresses the Pro-inflammatory Cytokines ].

• Chun-Xi Zhang
• Tao Luo
• Peng-Jiao Ma
• Chu-Han Wang
• Jing Suo
• Xiao-Qian Zhai
• Xuan Peng
• Lang Bao

抄録

目的:

(MTB)Rv3084がコードするエステラーゼLipRの生物学的特性と免疫調節機能を探る。

Objective: To explore the biological characteristics of the esterase LipR encoded by (MTB) Rv3084 and its immunomodulatory function .

方法:

MTB H37Rv 株から遺伝子を増幅し、組換え発現プラスミドを構築した。配列決定後、組換えプラスミドを形質転換し、LipR タンパク質の発現と精製を行った。発現したタンパク質をウェスタンブロットアッセイで確認した。また、LipRの加水分解活性を検出し、LipR酵素活性に影響を与える因子を解析した。マウスを0.1mL（プラスミドDNA 100μgを含む）の組換え真核生物プラスミドを3回（1日目、8日目、15日目）筋肉内注射し、最後の注射から7日後にマウスを実行し、サイトカイン検出のために肺と脾臓を採取した。

Methods: The gene was amplified from MTB H37Rv strain to construct recombinant expression plasmid. After sequencing, the recombinant plasmid was transformed into for expression and purification of LipR protein. The expressed protein was confirmed with Western blot assay. The hydrolyzing activity of LipR was detected and the factors affecting LipR enzyme activity were analyzed. Mice were intramuscularly injected with 0.1 mL (containing plasmid DNA 100 μg) recombinant eukaryotic plasmid three times (day 1, 8, and 15); seven days after the last injection, the mice were executed, and the lung and spleen were taken for cytokine detection.

結果:

組換え発現プラスミドの構築に成功した結果、LipR タンパク質は主に包接体の形で発現しており、その相対分子量は約 33×10 であった。LipR は、pNP-アセテート（pNPA, C2）に最適な加水分解活性を持つ短炭素鎖エステルを好んで加水分解することと、高pH・高温度に耐性を持つことから、アルカリ性優熱性エステル分解酵素であることが示された。マウスモデルでは、LipRはインターフェロン-γ（IFN-γ）およびインターロイキン-2（IL-2）の分泌を阻害するが、IL-10の分泌を刺激することがわかった。

Results: The recombinant expression plasmid was successfully constructed and it was found that LipR protein was mainly expressed in the form of inclusion bodies in with the relative molecular mass of about 33×10 . LipR was demonstrated as an alkaline eurythermic esterase, due to the preference of hydrolyzing short carbon chain esters with optimal hydrolyzing activity on pNP-acetate (pNPA, C2) and the capability in tolerance of high pH and temperature; in the presence of different detergents or metal ions, the activity of LipR hydrolyzing pNP-butyrate (pNPB, C4) was inhibited to some extent. In the mouse model, it was found that LipR could inhibit the secretion of interferon-γ (IFN- γ) and interleukin-2 (IL-2), but to stimulate the secretion of IL-10.

結論:

エステラーゼLipRは、宿主内部の過酷な環境に耐えるために協力して、同時にプロ炎症性サイトカインの分泌を抑制し、その結果、宿主の免疫系の殺傷効果に影響を与える免疫モジュレーターとして作用するエステルラーゼの一つである可能性があります。

Conclusion: The esterase LipR may be one of the esterases help withstand harsh environment inside the host in collaboration, and simultaneously act as an immune modulator to inhibit the secretion of pro-inflammatory cytokines and consequently impact the killing effect of host immune system against .

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