フローサイトメトリーによるPlasmodium vivax merozoitesの簡単なex vivoファゴサイトーシスアッセイ

A simple, ex vivo phagocytosis assay of Plasmodium vivax merozoites by flow cytometry.

• Elizangela Farias
• Fhabiane Bezerra
• Djane Clarys Baia-da-Silva
• Yury Oliveira Chaves
• Tatiana Bacry Cardoza
• Maria Edilene Martins de Almeida
• Lucas Barbosa Oliveira
• Pritesh Lalwani
• Patrícia Puccinelli Orlandi
• Marcus Vinicius Guimaraes Lacerda
• Stefanie Costa Pinto Lopes
• Paulo Afonso Nogueira

抄録

貪食はマラリアに対する最初の防御ラインであるため、我々は、ワクチン候補の評価に応用できるPlasmodium vivax (P. vivax) メロゾアイトを用いた貪食アッセイ法を開発した。手短に言うと，シリンジ内で緩くパックしたセルロース粉末を用いて白血球を除去した後，E64プロテアーゼ阻害剤の存在下で，P. vivaxのトロフォゾアイトはメロゾイトに富むシゾント期まで成熟した。P. vivax Merozoite Surface Protein-1（Nterm-PvMSP1およびMSP119）のN末端およびC末端に対するヒトおよびマウス抗体を用いた2つの食細胞株において、メロゾイト・オプソニン依存性貪食に供されたメロゾイトを放出するために、Percoll勾配濃縮シゾントを化学的に破壊した。得られたアッセイは、メロゾイト段階のワクチン候補の評価のためのルーチンの食細胞アッセイとして使用するためのシンプルで効率的なものである。

As phagocytosis is the first line of defense against malaria, we developed a phagocytosis assay with Plasmodium vivax (P. vivax) merozoites that can be applied to evaluate vaccine candidates. Briefly, after leukocyte removal with loosely packed cellulose powder in a syringe, P. vivax trophozoites matured to the merozoite-rich schizont stages in the presence of the E64 protease inhibitor. The Percoll gradient-enriched schizonts were chemically disrupted to release merozoites that were submitted to merozoite opsonin-dependent phagocytosis in two phagocytic lines with human and mouse antibodies against the N- and C-terminus of P. vivax Merozoite Surface Protein-1 (Nterm-PvMSP1 and MSP119). The resulting assay is simple and efficient for use as a routine phagocytic assay for the evaluation of merozoite stage vaccine candidates.