インターフェロンγ-およびリポ多糖刺激馬の末梢血単核細胞による腫瘍壊死因子αの産生に対するポリ（ADP-リボース）ポリメラーゼ阻害剤のin vitro効果

In vitro effects of poly(ADP-ribose) polymerase inhibitors on the production of tumor necrosis factor-α by interferon- γ - and lipopolysaccharide-stimulated peripheral blood mononuclear cells of horses.

• Cristina Cacciolatti
• Mirella L Meyer-Ficca
• Louise L Southwood
• Ralph G Meyer
• Luigi Bertolotti
• Laura Zarucco

抄録

目的:

馬の炎症のin vitroモデルとして、インターフェロン-γ（IFN-γ）およびリポ多糖類（LPS）刺激末梢血単核球（PBMCs）による腫瘍壊死因子-α（TNF-α）産生に対するポリ（ADP-リボース）ポリメラーゼ-1（PARP1）阻害剤の効果を評価すること。

OBJECTIVE: To evaluate effects of poly(ADP-ribose) polymerase-1 (PARP1) inhibitors on the production of tumor necrosis factor-α (TNF-α) by interferon-γ (IFN-γ)- and lipopolysaccharide (LPS)-stimulated peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of horses as an in vitro model of inflammation in horses.

サンプル:

健康な研究用馬6頭のPBMCのサンプル1,440個。

SAMPLE: 1,440 samples of PBMCs from 6 healthy research horses.

手続き:

ヘパリン処理した全血サンプルからPBMC培養物を得た。2頭の馬から得た48個のPBMCサンプル（各24個）の初期用量反応試験を、低レベルおよび高レベル刺激濃度として使用するためのIFN-γおよびLPSの濃度を決定するために使用した。6頭の馬からの72個のPBMCサンプルを、4つのPARP1阻害カテゴリーのうちの1つに等しく割り当てた。ＰＡＲＰ１阻害剤なし（ＰＡＲＰ１阻害コントロール）；２-（-（）-２-メチルピロリジン-２-イル）-１-ベンズイミダゾール-４-カルボキサミドジヒドロクロライド（ＡＢＴ８８８）。4-（3-（1-（シクロプロパンカルボニル）ピペラジン-4-カルボニル）-4-フルオロベンジル）フタラジン-1（2）-オン（AZD2281）；または-（6-オキソ-5,6-ジヒドロフェナントリジン-2-イル）--ジメチルアセトアミド塩酸塩（PJ34）。各馬および各PARP1阻害カテゴリからのPBMCのサンプルを、IFN-γおよびLPS刺激の3つのレベルのうちの1つに割り当てた：なし（コントロール）、低刺激、または高刺激。24時間の培養期間の後、TNF-α ELISAを用いて上清中のTNF-α濃度を測定した。結果は、治療法をまたいで、各馬について比較した。データは反復測定ANOVAで分析した。

PROCEDURES: From heparinized whole blood samples, PBMC cultures were obtained. An initial dose-response trial on 48 PBMC samples from 2 horses (24 samples each) was used to determine concentrations of IFN-γ and LPS for use as low- and high-level stimulation concentrations. Seventy-two PBMC samples from 6 horses were assigned equally to 1 of 4 PARP1 inhibition categories: no PARP1 inhibitor (PARP1 inhibition control); 2-(()-2-methylpyrrolidin-2-yl)-1-benzimidazole-4-carbozamide dihydrochloride (ABT888);4-(3-(1-(cyclopropanecarbonyl)piperazine-4-carbonyl)-4-fluorobenzyl)phthalazin-1(2)-one (AZD2281); or -(6-oxo-5,6-dihydrophenanthridin-2-yl) --dimethylacetamide hydrochloride (PJ34). Samples of PBMCs from each horse and each PARP1 inhibition category were then assigned to 1 of 3 levels of IFN-γ and LPS stimulation: none (control), low stimulation, or high stimulation. After a 24-hour incubation period, a TNF-α ELISA was used to measure TNF-α concentration in the supernatant. Results were compared across treatments and for each horse. Data were analyzed with repeated-measures ANOVA.

結果:

TNF-α濃度の中央値は、PJ34 処理した高レベル刺激 PBMC の方が、PARP1 阻害対照の高レベル刺激 PBMC よりも有意に低かった；しかしながら、TNF-α濃度の他の意味のある差は、阻害と刺激の組み合わせの間では検出されなかった。

RESULTS: Median TNF-α concentration was significantly lower for PJ34-treated, high-level stimulated PBMCs than for PARP1 inhibition control, high-level stimulated PBMCs; however, no other meaningful differences in TNF-α concentration were detected among the inhibition and stimulation combinations.

結論および臨床的有用性:

その結果、PJ34 PARP1 阻害は、馬の炎症やエンドトキシン誘発損傷の軽減に役立つ可能性のある、馬の TNF-α産生を減少させる可能性が示唆されました。

CONCLUSIONS AND CLINICAL RELEVANCE: Findings suggested that PJ34 PARP1 inhibition may reduce TNF-α production in horses, a potential benefit in reducing inflammation and endotoxin-induced damage in horses.