グリコールメタクリレートで埋め込まれた軟骨をトリエチルカルボシアニンＤＢＴＣ（「エチル-ステインズオール」）で染色し、ラクナ間ネットワークを特別に参照した

Staining glycol methacrylate embedded cartilage with triethyl-carbocyanin DBTC ("ethyl-stains all") with special reference to the interlacunar network.

• M B Cole
• K R Narine

抄録

染料であるトリエチルカルボシアニンＤＢＴＣを、軟骨構造の差動染色のために試験した。新生児ラットからの大腿骨頭の関節軟骨を、組織学のために処理して、軟骨間ネットワークを実証した。グリコールメタクリレート（GMA）で埋め込まれた軟骨の切片を、最適な染色条件を決定するために、pH2.8、5.4、6.1および8.0で染色した。pH6.1でのみ、すべての軟骨構造が染色され、最高のコントラストが得られた。ストレプトミセス・ヒアルロニダーゼ、コンドロイチナーゼABC、ペプシン、トリプシンおよびプロナーゼ分解は、染色の選択性を評価するためにpH6.1で染色する前に実施した。未消化の軟骨細胞核クロマチンは暗紫色に染色され、染色強度はペプシンまたはトリプシン分解によってわずかに減少した。未消化軟骨細胞の細胞質は水色に染色されたが、ヒアルロニダーゼ消化後は紫色に染色された。未消化の細胞外マトリックスは薄紫色に染色された。染色はコンドロイチナーゼABC消化によってほぼ完全に除去され、ヒアルロニダーゼの影響を受けず、プロテイナーゼ消化後には影響を受けないか、または増加した。ネットワークに隣接するマトリックスの狭いゾーンの染色は、ネットワーク要素が細い暗線として現れる間、プロテイナーゼ消化によって阻止された。ネットワークは、ヒアルロン酸とタンパク質のコア要素がタンパク質のシースに囲まれたトリラミナー構造であるように見える。軟骨のトリエチルカルボシアニンDBTC染色は、メチレンブルー、トルイジンブルーまたはサフラニンOよりもわずかに多くの選択性とコントラストを提供しています。pH 6.1では、DNA、おそらくRNA、およびヒアルロン酸は濃い紫色を染色し、コンドロイチン硫酸、薄紫、タンパク質（コラーゲン）は、すべての場合は非常に薄紫を染色した。

The dye, triethyl-carbocyanin DBTC, was tested for differential staining of cartilage structures. Femoral head articular cartilage from neonatal rats was processed for histology to demonstrate the interlacunar network. Sections of glycol methacrylate (GMA) embedded cartilage were stained at pH 2.8, 5.4, 6.1 and 8.0 to determine the optimal staining conditions. Only at pH 6.1 were all cartilage structures stained and the best contrast achieved. Streptomyces hyaluronidase, chondroitinase ABC, pepsin, trypsin, and pronase digestions were carried out prior to staining at pH 6.1 to evaluate the selectivity of the stain. Undigested chondrocyte nuclear chromatin stained dark purple; staining intensity was reduced slightly by pepsin or trypsin digestion. Undigested chondrocyte cytoplasm stained light blue but stained purple after hyaluronidase digestion. Undigested extracellular matrix stained light violet; staining was almost entirely eliminated by chondroitinase ABC digestion, was unaffected by hyaluronidase, and was either unaffected or increased after proteinase digestion. Staining of a narrow zone of matrix adjacent to the network was prevented by proteinase digestion while the network element appeared as a thin dark line. The network appears to be a trilaminar structure; a core element of hyaluronic acid and protein surrounded by a protein sheath. Triethyl-carbocyanin DBTC staining of cartilage offers slightly more selectivity and contrast than methylene blue, toluidine blue or safranin O. At pH 6.1, DNA, perhaps RNA, and hyaluronic acid stained deep purple; chondroitin sulfate, light violet; protein (collagen), stained very light violet if at all.