口腔内の微生物組成変化に対する新規抗体評価法

Novel antibody assessment method for microbial compositional alteration in the oral cavity.

抄録

近年、様々な疾患の発症に常在微生物叢の組成の変化であるディスバイオーシスが深く関与していることが明らかにされています。口腔内の常在菌フローラの組成が、歯周病などの口腔内疾患や炎症性腸疾患などの全身疾患と密接に関係していることが明らかになりつつあるのです。細菌叢の変化を調べる方法として次世代シークエンス技術が用いられていますが、細菌の活動をより詳細に理解するためには、細菌叢を評価する分析方法の追加が必要とされています。また、口腔内環境は、唾液に含まれる分泌抗体が細菌叢の形成に関与しているという特徴があるため、細菌叢を評価するためには、唾液に含まれる分泌抗体が必要である。そこで本研究では，唾液中の抗体だけでなく，細菌表面抗原に対する特異抗体を用いたフローサイトメトリー（FCM）により，細菌叢の組成変化を評価する新たな方法を開発することを目指した．う蝕の原因物質であるβリポ酸に対する特異抗体とヒトIgAを用い、ヒト唾液中の細菌サンプルをFCMで分析した。その結果，被験者の口腔衛生状態によって，異なるプロファイルが得られることがわかった．これらの結果から，口腔内細菌と結合する抗体の量や種類の変化が，口腔内細菌叢の異常を評価する指標となる可能性が示唆された．したがって，今回確立したプロトコルは，口腔内細菌叢の変化の評価法として応用できる可能性がある．

Recently, it has been demonstrated that dysbiosis, an alteration in commensal microflora composition, is intimately involved in the onset of a variety of diseases. It is becoming increasingly evident that the composition of commensal microflora in the oral cavity is closely connected to oral diseases, such as periodontal disease, and systemic diseases, such as inflammatory bowel disease. Next-generation sequencing techniques are used as a method to examine changes in bacterial flora, but additional analytical methods to assess bacterial flora are needed to understand bacterial activity in more detail. In addition, the oral environment is unique because of the role of secretory antibodies contained in saliva in the formation of bacterial flora. The present study aimed to develop a new method for evaluating the compositional change of microbiota using flow cytometry (FCM) with specific antibodies against the bacterial surface antigen, as well as salivary antibodies. Using specific antibodies against , a causative agent of dental caries, and human IgA, bacterial samples from human saliva were analyzed via FCM. The results showed that different profiles could be obtained depending on the oral hygiene status of the subjects. These results suggest that changes in the amount and type of antibodies that bind to oral bacteria may be an indicator for evaluating abnormalities in the oral flora. Therefore, the protocol established in this report could be applied as an evaluation method for alterations in the oral microbiota.