TMT10plexマスタグ標識を用いた時間分解型での発芽酵母ホスホプロテオームダイナミクスの評価

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STAR Protoc.2020 Jun;1(1):100022. S2666-1667(20)30009-5. doi: 10.1016/j.xpro.2020.100022.Epub 2020-06-19.

TMT10plexマスタグ標識を用いた時間分解型での発芽酵母ホスホプロテオームダイナミクスの評価

Assessing Budding Yeast Phosphoproteome Dynamics in a Time-Resolved Manner using TMT10plex Mass Tag Labeling.

Andrew W Jones
Helen R Flynn
Frank Uhlmann
Ambrosius P Snijders
Sandra A Touati

PMID: 32685930 PMCID: PMC7357674. DOI: 10.1016/j.xpro.2020.100022.

抄録

アミン反応性タンデムマスタグ10plex（TMT10plex）標識は、タンデム質量分析法（MS/MS）によるタンパク質の多重同定と定量分析を可能にします。我々はこの技術を用いて、野生型とホスファターゼ変異体のバックグラウンドから時間分解的に収集した20のサンプルを標識し、ホスホプロテオームのダイナミクスを特徴付けるために使用してきました。ここでは、生物学的および質量分析サンプルの準備と分析のための詳細なプロトコルを提供します。このプロトコルの使用および実行に関する完全な詳細については、Touati etal.(2019).

Amine-reactive Tandem Mass Tag 10plex (TMT10plex) labeling permits multiplexed protein identification and quantitative analysis by tandem mass spectrometry (MS/MS). We have used this technology to label 20 samples collected in a time-resolved manner from a wild-type and phosphatase mutant background to characterize phosphoproteome dynamics. Here, we provide a detailed protocol for biological and mass spectrometry sample preparation and analysis. For complete details on the use and execution of this protocol, please refer to Touati et al. (2019).