ヒト近位尿細管HK-2細胞の毒性化合物に対する感受性に対する反復継代の効果

The effect of repeated passaging on the susceptibility of human proximal tubular HK-2 cells to toxic compounds.

• J Handl
• J Čapek
• P Majtnerová
• J Báčová
• T Roušar

抄録

ヒト近位尿細管HK-2細胞株は、近位尿細管毒性の研究に一般的に用いられる不死化細胞株である。現在、その使用が増加しているにもかかわらず、残念ながら、通過に伴うHK-2細胞の機能変化に焦点を当てた研究はない。そこで、本研究の目的は、モデル腎毒性化合物（アセトアミノフェン、シスプラチン、CdCl(2)）を6時間および24時間投与した後、13週間の連続パッセージングを行った場合のHK-2細胞の機能的安定性を評価することであった。ショートタンデムリピートプロファイル、ダブリング時間、細胞径、グルタチオン濃度、細胞内デヒドロゲナーゼ活性を各試験区でHK-2細胞で測定した。その結果、HK-2細胞は継代中に安定した形態、細胞サイズ、細胞更新を示すことが示された。一方で、HK-2細胞の毒性化合物に対する感受性には、継代が有意な影響を及ぼすことが観察された。結果の最大の差は、カドミウム処理細胞とシスプラチン処理細胞の両方でパセージをまたいで認められた。以上のことから、HK-2細胞の科学的研究の成果は、中期培養や13週間のパッセージングを行っても、パッセージ数によって影響を受ける可能性があると結論づけた。

The human proximal tubular HK-2 cell line is an immortalized cell line commonly used for studying proximal tubular toxicity. Even as their use is presently increasing, there unfortunately are no studies focused on functional changes in HK-2 cells associated with passaging. The aim of the present study, therefore, was to evaluate the functional stability of HK-2 cells during 13 weeks of continuous passaging after 6 and 24 h of treatment with model nephrotoxic compounds (i.e., acetaminophen, cisplatin, CdCl(2)). Short tandem repeat profile, the doubling time, cell diameter, glutathione concentration, and intracellular dehydrogenase activity were measured in HK-2 cells at each tested passage. The results showed that HK-2 cells exhibit stable morphology, cell size, and cell renewal during passaging. Mean doubling time was determined to be 54 h. On the other hand, we observed a significant effect of passaging on the susceptibility of HK-2 cells to toxic compounds. The largest difference in results was found in both cadmium and cisplatin treated cells across passages. We conclude that the outcomes of scientific studies on HK-2 cells can be affected by the number of passages even after medium-term cultivation and passaging for 13 weeks.