ソニックヘッジホッグは関節リウマチにおける滑膜細胞の増殖、移動、浸潤を制御している

Sonic Hedgehog Regulates Proliferation, Migration and Invasion of Synoviocytes in Rheumatoid Arthritis JNK Signaling.

• Shangling Zhu
• Yuanmei Ye
• Yiming Shi
• Junlong Dang
• Xiaoxue Feng
• Yingdi Chen
• Fang Liu
• Nancy Olsen
• Jianlin Huang
• Song Guo Zheng

抄録

活性化線維芽細胞様滑膜細胞(FLS)は、関節リウマチ(RA)における滑膜パンヌスの形成と関節破壊に中心的な役割を果たしている。FLSsを標的とすることは、潜在的な治療戦略となる可能性がある。本研究の目的は、関節リウマチ患者におけるソニックヘデホッグ（SHH）シグナル伝達経路によって促進されるFLSの増殖、遊走、浸潤におけるc-Jun N末端キナーゼ（JNK）の役割を調べることである。SHHシグナルの活性化はリアルタイムPCRとウェスタンブロットで評価した。JNKとc-Junのリン酸化レベルはウェスタンブロットで検出された。FLSsの増殖は、Cell Counting Kit-8 (CCK-8)アッセイおよびフローサイトメトリーにより定量した。細胞の遊走および浸潤は、創傷治癒アッセイおよびトランスウェルチャンバーアッセイにより評価した。ヒト化滑膜炎動物モデルを用いてFLSの浸潤性を評価した。SHHアゴニスト（SAG）の処理はJNKとc-Junのリン酸化レベルを有意に増加させ、SHHアンタゴニスト（シクロパミン）はFLSのphospho-JNKとphospho-c-Junの発現を有意に減少させることが観察された。SAGによって刺激されたphospho-c-Junの上昇したレベルは、JNK阻害剤(SP600125)の存在下で減少した( < 0.001)。FLSの増殖、遊走および浸潤はSHHアゴニストによって促進された( < 0.05)。また、FLSの軟骨への侵入はSHHの過剰発現により増加し、JNKのシグナル伝達を阻害することにより過剰な侵入が抑制されることが示された(<0.01)。これらの結果から、JNKはFLSsにおけるSHHシグナル伝達の効果を媒介する下流分子の一つであることが示唆された。これらの結果は、SHH-JNKシグナル伝達がFLSの攻撃性を抑制し、関節障害を予防するための治療標的となる可能性を示唆しています。

Activated fibroblast-like synoviocytes (FLSs) play a central role in the formation of synovial pannus and joint destruction in rheumatoid arthritis (RA). Targeting FLSs could be a potential therapeutic strategy. The objective of this study is to explore the role of c-Jun N-terminal kinase (JNK) in proliferation, migration and invasion of FLSs promoted by the sonic hedeghog (SHH) signaling pathway in patients with RA. Activation of SHH signaling was evaluated by real-time PCR and Western Blot. Levels of phosphorylation of JNK and c-Jun were detected by Western Blot. FLSs proliferation was quantified by Cell Counting Kit-8 (CCK-8) assay and flow cytometry. Cell migration and invasion were assessed by wound healing assay and Transwell chamber assay. Invasiveness of FLSs was evaluated using a humanized synovitis animal model. We observed that treatment of SHH agonist (SAG) significantly increased the levels of phosphorylation of JNK and c-Jun, while SHH antagonist (cyclopamine) significantly decreased the expression of phospho-JNK and phospho-c-Jun in FLSs. The elevated level of phospho-c-Jun stimulated by SAG was decreased in the presence of JNK inhibitor (SP600125) ( < 0.001). FLSs proliferation, migration and invasion were promoted by SHH agonist ( < 0.05). However, the enhanced aggressiveness of FLSs was abolished in the presence of JNK inhibitor ( < 0.05). study showed that the invasion of FLSs into cartilage was increased by SHH overexpression and the excessive invasiveness was inhibited by blockade of JNK signaling ( < 0.01). These results suggest that JNK is one of the downstream molecules mediating the effect of SHH signaling in FLSs. These findings indicate that SHH-JNK signaling could be a potential therapeutic target to suppress the aggressiveness of FLSs and prevent articular damage of RA.

Copyright © 2020 Zhu, Ye, Shi, Dang, Feng, Chen, Liu, Olsen, Huang and Zheng.