L-α-グリセリルホスホリルコリンのHPLC法開発とバリデーションによる本質的安定性の研究

Intrinsic stability study of L-α-glycerylphosphorylcholine with HPLC method development and validation.

• Hongwei Zhao
• Ling Sun
• Huanhuan Chen
• Lili Xiang
• Dongying Chen

抄録

L-α-グリセリルホスホリルコリン(L-α-GPC)は、アルツハイマー病患者の認知機能低下の抑制に有効である。本研究では、L-α-GPCの本質的な安定性を評価するために、屈折率検出器を用いたHPLC法を開発した。L-α-GPCとその主要な分解生成物の分離は、メタノール-20mMギ酸アンモニウム水溶液(pH3.2) (65:35, v/v)を移動相とした順相シリカゲルカラム(4.6mm×250mm)を用いて、アイソクラティックモードで行った。HPLC法は、精度、精度及び堅牢性の点で満足のいくものであることが確認された。その結果、L-α-GPCは光分解,熱,酸化,酸性条件下で安定であるが、アルカリ性条件下ではL-α-GPCのリン酸エステル結合が特異的に切断されるために比較的敏感であることがわかった。また、アルカリ分解のための予備的な速度論的研究を実施し、対応する速度論的パラメータを得た。その結果、開発したHPLC法は、L-α-GPCの化学構造上特徴づけられた2つのリン酸エステル結合の安定性の違いを区別することができると結論づけることができた。

L-α-Glycerylphosphorylcholine (L-α-GPC) is effective to control the symptoms of cognitive decline for the patients of Alzheimer's disease. In this study, an HPLC method coupled with a refractive index detector was developed to evaluate the intrinsic stability of L-α-GPC. The separation of L-α-GPC and its major potential degradation products was achieved on a normal-phase silica gel column (4.6 mm × 250 mm) with the mobile phase consisting of methanol-20 mM ammonium formate aqueous solution (pH 3.2) (65:35, v/v) in isocratic mode. The HPLC method was validated satisfactorily with respect to precision, accuracy and robustness. It is found that L-α-GPC is stable under the photolytic, thermal, oxidative and acidic conditions, while relatively sensitive to alkaline condition due to the specific breakage of phosphate ester bond in the moiety of L-α-GPC. A preliminary kinetics study for the alkaline degradation was conducted with the corresponding kinetics parameters obtained. It can be concluded that the developed HPLC method is capable of distinguishing the stability difference between the two phosphate ester bonds characterized on the L-α-GPC chemical structure.

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