免疫組織化学分析用抗CD20モノクローナル抗体（CMab-60）の確立

Establishment of an Anti-CD20 Monoclonal Antibody (CMab-60) for Immunohistochemical Analyses.

• Yoshikazu Furusawa
• Mika K Kaneko
• Yukinari Kato

抄録

CD20を検出するためには、感度の高い特異的なモノクローナル抗体（mAbs）が必要です。この抗原は、いくつかのＢリンパ球抗原の一つであり、Ｂ細胞リンパ腫の診断に使用されるあらゆる用途の標的である。多くの抗CD20 mAbsが確立されていますが、これらの抗体の用途は限られています。本研究では、フローサイトメトリー、ウエスタンブロッティング、免疫組織化学的解析などの幅広い応用に適した高感度かつ特異的な抗CD20 mAbsを確立することを目指しています。細胞ベースの免疫化とスクリーニング（CBIS）法を用いて、CD20安定型トランスフェクタントを用いてすべての手順を行い、クローンCMab-60（IgG、κ）を開発しました。フローサイトメトリーでは、CMab-60はLN229細胞でのCD20の過剰発現とBALL-1（ヒトB細胞白血病細胞株）での内因性CD20の過剰発現を検出したが、CD20ノックアウトBALL-1（BINDS-24）では反応せず、CD20に対する特異性を示した。ウェスタンブロットでは、CMab-60はCD20過剰発現チャイニーズハムスター卵巣K1、BALL-1、Raji（ヒトバーキットリンパ腫細胞株）を検出し、感度と特異性の両方を示した。さらに、免疫組織化学的解析では、B細胞リンパ腫はCMab-60で強く染色されたが、T細胞リンパ腫は染色されなかった。CBIS法により開発されたCMab-60は、フローサイトメトリー、ウエスタンブロッティング、免疫組織化学的解析により、リンパ腫組織中のCD20を発現する細胞の検出に有用であることが示された。

Sensitive and specific monoclonal antibodies (mAbs) are needed for detecting CD20. This antigen, one of several B lymphocyte antigens, is a target for every application used in the diagnosis of B cell lymphoma. Many anti-CD20 mAbs have been established, although applications of these antibodies are limited. This study aims to establish sensitive and specific anti-CD20 mAbs suitable for broad application, such as flow cytometry, Western blotting, and immunohistochemical analyses. Using the Cell-Based Immunization and Screening (CBIS) method, all procedures were performed by utilizing CD20-stable transfectants, and a clone, CMab-60 (IgG, kappa), was developed. In flow cytometry, CMab-60 detected overexpression of CD20 in LN229 cell and endogenous CD20 in BALL-1 (a human B cell leukemia cell line) but did not react with CD20-knockout BALL-1 (BINDS-24), indicating specificity for CD20. In Western blotting, CMab-60 detected CD20-overexpressing Chinese hamster ovary-K1, BALL-1, and Raji (a human Burkitt's lymphoma cell line) displaying both sensitivity and specificity. Furthermore, B cell but not T cell lymphomas were strongly stained with CMab-60 in immunohistochemical analyses. CMab-60, which was developed by CBIS method, is shown to be useful for the detection of cells expressing CD20 in lymphoma tissues by flow cytometry, Western blotting, and immunohistochemical analyses.