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リポソーマルドキソルビシンのBE試験をサポートするために、安定化凍結ヒト血漿中の遊離、カプセル化、総ドキソルビシンおよびドキソルビシノールを直接定量する
Direct quantitation of free, encapsulated, total doxorubicin and doxorubicinol in stabilized frozen human plasma to support a BE study of liposomal doxorubicin.
PMID: 32663760 DOI: 10.1016/j.jpba.2020.113388.
抄録
規制当局のガイダンスでは、リポソーマルドキソルビシン注射剤の生物学的同等性試験のために、カプセル化されたドキソルビシンと遊離ドキソルビシンの定量化が求められています。血漿サンプル中のリポソーム製剤は不安定であるため、サンプルの取り扱い中にリポソームカプセル化されたドキソルビシンから遊離薬物が放出されると、測定された遊離ドキソルビシン濃度が上昇する可能性がある。このような遊離薬物の放出を防ぐために、サンプルの収集、保存、抽出時に血漿サンプル中のリポソーム薬物を適切に安定化させるための安定化試薬と手順を開発し、検証することに成功しました。3つのLC-MS/MS法を開発し、関連する規制当局のガイダンスに従って、ヒト血漿中の遊離薬物、カプセル化薬物、および総ドキソルビシン濃度を直接定量するために完全に検証しました。方法1: 固相抽出法(SPE)を用いて、安定化剤で処理した血漿サンプルから、遊離のドキソルビシンおよびドキソルビシノールをそれぞれ1-400ng/mLおよび0.5-10ng/mLの直線的な範囲で定量する方法、方法2.方法2: カプセル化されたドキソルビシンをSPEを用いて安定化剤処理した血漿サンプルから50～50,000ng/mLの直線的な範囲で定量し、その後PPE抽出法を用いて定量する方法、方法3: PPEを用いて未処理血漿サンプルから50～50,000ng/mLの直線的な範囲でドキソルビシンの総濃度を定量する方法。3つの方法はすべて、Caelyx®とDuomeisu®（ドキソルビシン塩酸塩リポソーム注射剤、CSPC社製のドキソルビシンジェネリック製剤）の間の生物学的同等性試験のサポートに成功しました。全ドキソルビシン法、遊離ドキソルビシン/ドキソルビシノール法及びカプセル化ドキソルビシン法のインカードサンプル再分析（ISR）合格率は、それぞれ100％、84.7％/100％及び98.5％であった。測定された総ドキソルビシン濃度は、遊離ドキソルビシン濃度とカプセル化ドキソルビシン濃度の合計と一致した。
Regulatory guidance requires the quantification of encapsulated and free doxorubicin for a liposomal doxorubicin injection bioequivalence study. Due to the instability of liposome formulations in plasma samples, the release of free drug from the liposomal encapsulated doxorubicin during sample handling would result in elevation of measured free doxorubicin concentration. To prevent the potential release of free drug, stabilizer reagents and procedures were successfully developed and validated to adequately stabilize liposomal drugs in plasma samples during sample collection, storage and extraction. Three LC-MS/MS methods were developed and fully validated for direct quantitation of free, encapsulated and total doxorubicin concentrations in human plasma according to relevant regulatory guidance: Method 1: Quantitation of free doxorubicin and doxorubicinol at a linear range of 1-400 ng/mL and 0.5-10 ng/mL, respectively, from stabilizer treated plasma samples using solid phase extraction (SPE); Method 2: Quantitation of encapsulated doxorubicin at a linear range of 50-50,000 ng/mL from the stabilizer treated plasma sample using SPE followed by PPE extraction method; Method 3: Quantitation of total concentration of doxorubicin from untreated plasma samples at a linear range of 50-50,000 ng/mL using PPE. All three methods were successfully used to support a bioequivalence study between Caelyx® and Duomeisu® (Doxorubicin Hydrochloride Liposomal injection, generic doxorubicin formulation produced by CSPC). Incurred sample reanalysis (ISR) passing rate for total doxorubicin, free doxorubicin/doxorubicinol, and encapsulated doxorubicin methods were 100 %, 84.7 %/100 %, and 98.5 %, respectively. The measured total doxorubicin concentrations matched the sum of free and encapsulated doxorubicin concentrations.
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