日本語AIでPubMedを検索
淡水エビ（Macrobrachium rosenbergii）のヘモシアニンのレクチン様活性
Lectin-Like Activity of Hemocyanin in Freshwater Prawn, Macrobrachium rosenbergii.
PMID: 32661731 DOI: 10.1007/s10930-020-09912-1.
抄録
レクチンは、細菌や赤血球など無脊椎動物の細胞表面の糖質と結合して凝集を起こし、異物の認識を仲介するタンパク質である。本研究では、重要な養殖淡水エビであるMacrobrachium rosenbergiiの血球中に存在するレクチン分子を単離し、その特徴を明らかにした。成体エビの血清中のレクチンは、ウサギの赤血球を用いたヘマグルチン化（HA）試験により評価したところ、16～64 の範囲で力価が認められた。この血清中のヘマグルチニンは、ウサギ赤血球への結合に対するカルシウムイオンへの依存性から、C型レクチンであることが確認された。また、このヘマグルチニンは、pH5.0〜10.0、温度10〜40℃の範囲で安定であることが確認された。ヘマグルチニン阻害試験を行った糖類や糖タンパク質の中で、血清レクチンはN-アセチルノイラミン酸とフェチュインのみに特異的であり、それぞれの最小阻害濃度は50mMと0.31mg/mlであった。さらに、ウサギ赤血球ストロマ上でのアフィニティークロマトグラフィーによりレクチンを精製したところ、ウサギ赤血球とのヘマグルチネーションが認められた。電気泳動分析では、精製されたレクチンは、ネイティブグラジエントPAGEでは分子量427kDaのバンドが1本、SDS-PAGEでは81と73kDaの2つの構成ポリペプチド鎖を示した。これらのポリペプチドをMALDI-TOF/TOF質量分析で分析し、ヘモシアニンと同定した。このことから、M. rosenbergiiのヘモシアニンはレクチン様活性を有していると結論づけられた。
Lectins are proteins that bind to the carbohydrate moieties on surface of bacteria, erythrocytes and other cells of invertebrates causing agglutination and mediate in recognition of foreign substances. In the present study, we isolated and characterized a lectin molecule present in the hemolymph of Macrobrachium rosenbergii, an important cultured freshwater prawn. Lectin in serum samples of adult prawns was assessed through hemagglutination (HA) test using rabbit RBC that showed a titre ranging from 16 to 64. This serum hemagglutinin was confirmed as a C-type lectin based on its dependency on calcium ions towards binding to rabbit RBCs. The hemagglutinin was also found to be stable at the pH range of 5.0-10.0 and temperature range of 10-40 °C. Of various sugars and glycoproteins tested in hemagglutination inhibition assay, the serum lectin was found specific only to N-acetylneuraminic acid and fetuin with respective minimum inhibitory concentrations at 50 mM and 0.31 mg/ml. Further, the lectin was purified by affinity chromatography on rabbit erythrocyte stroma, which showed hemagglutination with rabbit RBC. In electrophoretic analyses, the purified lectin showed one band with molecular weight of ~ 427 kDa in native gradient PAGE, and its two constituent polypeptide chains of ~ 81 and ~ 73 kDa in SDS-PAGE. These polypeptides were analysed in MALDI-TOF/TOF mass spectrometry and identified as hemocyanins. It was hence, concluded that hemocyanin in M. rosenbergii possesses lectin-like activity.