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LC-MS/MSによるヒト血漿中及び尿中のLNA-i-miR-221定量のための生物学的分析法の開発と検証
Development and validation of bioanalytical methods for LNA-i-miR-221 quantification in human plasma and urine by LC-MS/MS.
PMID: 32659676 DOI: 10.1016/j.jpba.2020.113451.
抄録
13merオリゴヌクレオチドであるLNA-i-miR-221は、前臨床試験で良好な有効性と安全性が証明され、規制当局から臨床試験への使用が承認されている。本研究の目的は、ヒト血漿および尿中のLNA-i-miR-221を定量するためのLC-MS/MS法を開発し、その妥当性を検証することである。クロマトグラフィー分離は、ヘキサフルオロ-2-プロパノール/トリエチルアミン緩衝液とメタノールを移動相として使用し、HALO C18カラム上のグラジエントシステムを用いて行った。LNA-i-miR-221は、負イオンモードのエレクトロスプレーイオン化源を用いたタンデム質量分析計で検出した。その結果、ヒト血漿では50-25000ng/mL、尿では50-50000ng/mLの校正範囲内で良好な直線性を示した。これらの方法は、ヒトの血漿と尿の両方のマトリックスにおいて、正確、正確、かつ選択的であることが証明された。これらの検証済みの方法は信頼性が高く、現在、難治性多発性骨髄腫および進行性固形腫瘍の患者を対象としたLNA-i-miR-221のヒト初の臨床試験をサポートするために使用されています。
LNA-i-miR-221, a 13-mer oligonucleotide, has proved favorable efficacy and safety profiles in the preclinical studies, leading to being approved for use in clinical trials by regulatory authorities. The objective of this study was to develop and validate LC-MS/MS methods to quantify LNA-i-miR-221 in human plasma and urine. Chromatographic separation was performed with a gradient system on HALO C18 column using hexafluoro-2-propanol/triethylamine buffer and methanol as mobile phase. LNA-i-miR-221 was detected on tandem mass spectrometer with electrospray ionization source in negative ion mode. The methods showed good linearity within the calibration range of 50-25000 ng/mL and 50-50000 ng/mL for human plasma and urine, respectively. The methods proved to be accurate, precise and selective in both human matrices. These validated methods are reliable and are currently in use to support a first-in-human clinical trial of LNA-i-miR-221 in patients affected by refractory multiple myeloma and advanced solid tumors.
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