Argonaute-2とmicroRNA-146aの協同複合体は、フラップエンドヌクレアーゼ1を介してB型肝炎ウイルスの複製を制御しています

The cooperative complex of Argonaute-2 and microRNA-146a regulates hepatitis B virus replication through flap endonuclease 1.

• Min Ji
• Xiaoping Mei
• Xunming Jing
• Xu Xu
• Xing Chen
• Wanlong Pan

抄録

エイム:

B型肝炎ウイルス（HBV）は、様々な肝臓病の主な原因となっています。既存の抗ウイルス剤ではHBVを体内から根絶することはできず、その主な原因はHBVの複製の分子機構が不明であることです。フラップエンドヌクレアーゼ1（FEN1）は、弛緩した環状DNA（HBV rcDNA）を共有結合的に閉じた環状DNA（HBV cccDNA）に修復し、HBVのDNA複製を促進することができるが、その具体的な制御機構は明らかになっていない。また、miR-146aはHBV複製の制御と密接な関係がある。本研究では、miR-146aがFEN1を介してHBV cccDNAの形成を制御しているかどうかを明らかにすることを目的としている。

AIM: Hepatitis B virus (HBV) is a major cause of a variety of liver diseases. Existing antiviral drugs cannot eradicate HBV from our body, and the main reason is unclear on the molecular mechanism of HBV replication. Flap endonuclease 1 (FEN1) can repair relaxed circular DNA (HBV rcDNA) to covalently closed circular DNA (HBV cccDNA) that promotes HBV DNA replication, while its specific regulatory detail remains unclear. In addition, miR-146a is close related to regulation in HBV replication. This study aims to explore whether miR-146a regulates HBV cccDNA formation through FEN1.

主な方法:

HBV安定複製細胞株HepG2.2.15とその親細胞株HepG2にmiR-146aとFEN1プラスミドをトランスフェクトしたHBV安定複製細胞株HepG2において、miR-146a、FEN1、HBVコピーの発現をqRT-PCRとウエスタンブロットで調べ、Ago2 siRNAとAgo2 RNA結合タンパク質免疫沈降（RIP）によりArgonaute-2（Ago2）とmiR-146aの協働体を同定した。

MAIN METHODS: We investigated the expression of miR-146a, FEN1 and HBV copies in HBV stable replication cell line HepG2.2.15 and its parent cell line HepG2 transfected miR-146a and FEN1 plasmid by qRT-PCR and western blot, to identify the cooperation of Argonaute-2 (Ago2) and miR-146a by Ago2 siRNA and Ago2 RNA Binding Protein Immunoprecipitation (RIP).

重要な結果:

対照群と比較して、HepG2.2.15ではmiR-146aの発現が有意に上昇し、FEN1やHBVコピーの発現も有意に上昇していることがわかった。逆に、HepG2.2.15では、miR-146aの標的遺伝子であるインターロイキン-1受容体関連キナーゼ1（IRAK1）と腫瘍壊死因子受容体関連因子6（TRAF6）の発現が有意に低下していた。Ago2 siRNAとAgo2 RIPの使用により、Ago2がmiR-146aのキャリアとしてHBV複製を促進することがわかりました。

KEY FINDINGS: Compared with the control group, we found that the expression of miR-146a was significantly up-regulated in HepG2.2.15, and the expression of FEN1 and HBV copies were also significantly up-regulated. On contrary, the expression of target gene of miR-146a, interleukin-1 receptor-associated kinase 1 (IRAK1) and tumor necrosis factor receptor-associated factor-6 (TRAF6), was significantly decreased in HepG2.2.15. With the use of Ago2 siRNA and then Ago2 RIP, we found that Ago2 performed as a carrier for miR-146a to promote HBV replication.

意義:

この結果は、HBV複製生命における新規なmiR-146a→FEN1→HBV DNA制御軸を示唆している。Ago2はmiR-146aと協力して、下流の標的遺伝子IRAK1/TRAF6を介してFEN1タンパク質の転写・発現レベルを制御し、HBV複製を促進する。

SIGNIFICANCE: The results suggest a novel miR-146a → FEN1 → HBV DNA regulatory axis in HBV replication life. Ago2 cooperates with miR-146a to regulate the transcription and expression level of FEN1 protein through the downstream target gene IRAK1/TRAF6, and to promote HBV replication.

Copyright © 2020. Published by Elsevier Inc.