フローサイトメトリー解析のためのマウス腎臓レジデントCD8+ T細胞の単離

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis.

• Wei Liao
• Chaoyu Ma
• Nu Zhang

抄録

組織常駐型メモリーT細胞（TRM）は、免疫学研究の分野で急速に拡大しています。様々な非リンパ球性組織からT細胞を単離することは、TRMを研究するための重要なステップの一つです。リンパ球単離プロトコルには、臓器ごとに若干の違いがあります。腎臓は、特に病原体に曝露された後や自己免疫活性化後に免疫細胞が多く浸潤する重要な非リンパ系臓器である。近年、我々の研究室を含む複数の研究室では、マウスとヒトの両方において、生理学的および病理学的な様々な設定において、腎臓に常駐するCD8 T細胞の特徴を明らかにし始めている。Tリンパ球が豊富に存在することから、腎臓は非粘膜組織やノンバリア組織におけるTRMを研究するための魅力的なモデル臓器となっている。ここでは、全身性ウイルス感染後のマウス腎臓からCD8 T細胞を単離するためにTRMに焦点を当てた研究室で一般的に使用されるプロトコルを説明します。簡潔に、C57BL/6マウスの急性リンパ球性絨毛膜炎ウイルス（LCMV）感染モデルを使用して、我々は、血管内CD8 T細胞標識、酵素消化、および密度勾配遠心分離を実証し、マウス腎臓からリンパ球を単離し、濃縮し、その後のフローサイトメトリー分析のためのサンプルを作成する。

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the key steps to investigate TRMs. There are slight variations in lymphocyte isolation protocols for different organs. Kidney is an essential non-lymphoid organ with numerous immune cell infiltration especially after pathogen exposure or autoimmune activation. In recent years, multiple labs including our own have started characterizing kidney resident CD8 T cells in various physiological and pathological settings in both mouse and human. Due to the abundance of T lymphocytes, kidney represents an attractive model organ to study TRMs in non-mucosal or non-barrier tissues. Here, we will describe a protocol commonly used in TRM-focused labs to isolate CD8 T cells from mouse kidneys following systemic viral infection. Briefly, using an acute lymphocytic choriomeningitis virus (LCMV) infection model in C57BL/6 mice, we demonstrate intravascular CD8 T cell labeling, enzymatic digestion, and density gradient centrifugation to isolate and enrich lymphocytes from mouse kidneys to make samples ready for the subsequent flow cytometry analysis.