機械的鈍角解剖を用いた効果的な胚乳頭外胚葉生検の方法：アステップバイステップでの実証

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Fertil. Steril..2020 Jul;S0015-0282(20)30526-4. doi: 10.1016/j.fertnstert.2020.05.035.Epub 2020-07-09.

機械的鈍角解剖を用いた効果的な胚乳頭外胚葉生検の方法：アステップバイステップでの実証

An effective method for trophectoderm biopsy using mechanical blunt dissection: a step-by-step demonstration.

Dalei Yang
Di Feng
Yingzhuo Gao
Matthew Sagnelli
Xiuxia Wang
Da Li

PMID: 32654814 DOI: 10.1016/j.fertnstert.2020.05.035.

抄録

目的:

機械的鈍角解剖(MBD)を用いた段階や特徴の異なる胚盤胞に対する頭皮外胚葉生検の効果的な方法を提示すること。

OBJECTIVE: To present an effective approach to trophectoderm biopsy for blastocysts of different stages and characteristics by mechanical blunt dissection (MBD).

デザイン:

静止画と操作動画で段階的にデモンストレーションを行い、皮下組織生検のコツを説明します。(このデモンストレーションは、中国医科大学盛井病院生殖研究倫理委員会の承認を得ています)セッティング。Invitro受精実験室。

DESIGN: Stepwise demonstration with still pictures and operational video clips to explain tips and tricks for trophectoderm biopsy. (This demonstration was approved by the Reproductive Study Ethics Committee at Shengjing Hospital of China Medical University.) SETTING: In vitro fertilization laboratory.

患者:

着床前遺伝子検査を受けた患者。

PATIENT(S): Patients who underwent preimplantation genetic testing.

インターベンション:

マイクロマニピュレーション法を用いた胚盤胞頭皮細胞生検の例示された技術は、人工的な収縮、帯状隆起体の穿孔、穿孔からの培地の注入、生検用ピペット（外径２７μｍ；完全に拡大した胚盤胞およびピーナッツ型の孵化胚盤胞のための外径２０μｍ）、ＭＢＤと組み合わせたレーザーパルスによる前頭皮細胞の剥離（生検および保持ピペットの縁を使用して実行される）、および生検片の放出。

INTERVENTION(S): The illustrated techniques of blastocyst trophectoderm biopsy using micromanipulation methods include artificial shrinkage, zona pellucida drilling, injecting media from the drilling, aspiration of trophectoderm cells into the biopsy pipette (outer diameter 27 μm for fully expanded blastocysts and peanut-shaped hatching blastocysts; outer diameter 20 μm for 8-shaped hatching and hatched blastocysts), detachment of the trophectoderm cells by laser pulse combined with MBD (performed using the rims of the biopsy and holding pipettes), and release of the biopsy fragment.

主な成果測定項目:

温暖化後の生検成功率と生存率。

MAIN OUTCOME MEASURE(S): Successful biopsy rate and survival after warming.

結果:

我々の生検戦略は、拡大した胚盤胞段階までの培養中に胚を乱されずに残すことができる第3日目または第4日目の胚での孵化を支援することを伴わない。注目すべきことに、このアプローチは、異なるステージおよび特性の胚盤胞をサンプリングするためのいくつかの注目すべき利点を示し、それは望ましい成功した生検率（95.4％、n = 1,872）および暖機後の生存率（100％、n = 440）を維持しています。MBD法は、従来のレーザーのみの生検技術と比較して、より少ないレーザーパルスが使用されるため、熱損傷を低減する可能性がある。人工収縮後の非崩壊胚盤胞の場合は、錐体帯穿孔から培地を注入する戦略は、このように生検手順を容易にするため、錐体帯からトロフェット表皮細胞を分離するのに役立ちます。ピーナッツ型の孵化胚盤胞の場合、このアプローチは、生検ピペットへの前駆体細胞の吸引をよりよく制御し得る。特に、内側の細胞塊が、ペルシダ帯からヘルニア化している場合には、内側の細胞塊を損傷させないように、トロフェクト胚葉生検を内側の細胞塊から離して実施することができる。さらに、生検ピペット（外径２０μｍ）と組み合わせたＭＢＤアプローチは、トロフェクト胚葉細胞の目標数を効果的に制御することができ、したがって、孵化した胚盤胞から生検を得るプロセスを簡略化することができる。

RESULT(S): Our biopsy strategy does not involve assisted hatching on day-3 or day-4 embryos, which can leave the embryo undisturbed in culture up to the expanded blastocyst stage. Notably, this approach demonstrates several noteworthy advantages for sampling blastocysts of different stages and characteristics, and it maintains a desirable successful biopsy rate (95.4%, n = 1,872) and survival rate after warming (100%, n = 440). The MBD method may reduce thermal damage because fewer laser pulses are used, compared with the traditional laser-only biopsy techniques. For noncollapsed blastocysts after artificial shrinkage, the strategy of injecting medium from the zona pellucida drilling helps to separate the trophectoderm cells from the zona pellucida, thus facilitating the biopsy procedure. For peanut-shaped hatching blastocysts, this approach could provide better control over the aspiration of trophectoderm cells into the biopsy pipette. Especially if the inner cell mass is herniating from the zona pellucida, the trophectoderm biopsy can be performed away from the inner cell mass to avoid damaging it. In addition, the MBD approach combined with the biopsy pipette (outer diameter 20 μm) can effectively control the target number of trophectoderm cells, thus simplifying the process of obtaining a biopsy from a hatched blastocyst.

結論:

我々の生検アプローチは、いくつかの注目すべき利点を示している。その利点と実行の簡便さを考慮すると、異なるステージと特性の胚盤胞のためのこの系統的な生検方法は、広く適用することができる。

CONCLUSION(S): Our biopsy approach demonstrates several noteworthy advantages. Considering its benefits and the simplicity of its execution, this systematic biopsy method for blastocysts of different stages and characteristic can be widely applied.