マイクロRNA miR-145を条件付きで発現するトランスジェニックマウスの生成

Generation of transgenic mice that conditionally express microRNA miR-145.

• Dwitiya Sawant
• Emilie Klevenow
• Jeremy T Baeten
• Shelby Thomas
• Sathiyanarayanan Manivannan
• Simon J Conway
• Brenda Lilly

抄録

マイクロRNAは細胞の表現型を調節し、その機能は発生、恒常性維持、疾患などに関与しています。miR-145は、平滑筋の分化をサポートしたり、幹細胞の多能性を抑制したり、腫瘍の増殖や転移を抑制したりするなど、様々な表現型を制御することが知られています。我々の研究室では、miR-145がTGF-βシグナル伝達経路を阻害することで心筋線維化を抑制することを明らかにした。本研究室では、miR-145がTGF-x3B2;シグナル伝達経路を阻害することで心筋線維化を抑制することを明らかにした。本研究では、Cre組換え酵素を介した活性化により条件付きでmiR-145を発現するトランスジェニックマウスを作製した。個々の創始系統の特徴付けは、発育途上の心血管系におけるmiR-145の過剰発現が有害な影響を及ぼすことを示し、3つの独立したmiR-145トランスジェニック系統がCre依存性の致死性を示すことを示している。発現解析の結果、このトランスジーンは強固に発現しており、我々の解析により、miR-145の下流の新規ターゲットであるTnnt2が明らかになった。miR-145トランスジェニックマウスは、様々な細胞型におけるmiR-145の役割を理解し、疾患治療のための治療メディエーターとしての可能性に取り組むための貴重なツールである。

MicroRNAs are modulators of cellular phenotypes and their functions contribute to development, homeostasis, and disease. miR-145 is a conserved microRNA that has been implicated in regulating an array of phenotypes. These include supporting smooth muscle differentiation, repression of stem cell pluripotency, and inhibition of tumor growth and metastasis. Previously, our lab demonstrated that miR-145 acts to suppress cardiac fibrosis through inhibition of the TGF-β signaling pathway. The range of effects that miR-145 has on different cell types makes it an attractive microRNA for further study. Here we describe the generation of transgenic mice that conditionally express miR-145 through Cre recombinase-mediated activation. Characterization of individual founder lines indicates that overexpression of miR-145 in the developing cardiovascular system has detrimental effects, with three independent miR-145 transgenic lines exhibiting Cre-dependent lethality. Expression analysis demonstrates that the transgene is robustly expressed and our analysis reveals a novel downstream target of miR-145, Tnnt2. The miR-145 transgenic mice represent a valuable tool to understand the role of miR-145 in diverse cell types and to address its potential as a therapeutic mediator for the treatment of disease.

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