日本語AIでPubMedを検索
異なるタイプのSARS-CoV-2サンプルの熱不活化。バイオセーフティ、分子検出、血清学的診断のためのプロトコルは？
Heat Inactivation of Different Types of SARS-CoV-2 Samples: What Protocols for Biosafety, Molecular Detection and Serological Diagnostics?
PMID: 32646015 DOI: 10.3390/v12070735.
抄録
SARS-CoV-2感染のリスクを最小化するための標準的な予防措置は、感染した細胞培養物および臨床検体が、感染性を低減または廃止するために何らかの不活化を受ける可能性があることを示唆しています。我々は、欧州標準規格NF EN 14476-A2の勧告に従って、（i）感染細胞培養上清、（ii）ウイルスをスパイクしたヒト血清（iii）および鼻咽頭検体を用いて、SARS-CoV-2の3つの熱不活化プロトコル（56℃-30分、60℃-60分、92℃-15分）を評価した。プロトコルとサンプルの種類にかかわらず、4 LogのTCID50の減少が観察された。しかしながら、6 Log TCIDを超えるウイルス負荷を含むサンプルは、感染性は10 TCID未満であったが、56℃-30分後および60℃-60分後にも感染性を有していた。56℃-30分と60℃-60分のプロトコルはRNAコピーの検出にほとんど影響を与えなかったのに対し、92℃-15分では検出限界が大幅に減少したことから、分子診断に先立って不活化するためにはこのプロトコルは避けるべきであることが示唆された。最後に、血清検体の56℃-30分処理は、市販のELISA法によるIgG検出結果にはほとんど影響を与えなかったが、中和力価の大幅な低下が認められた。
Standard precautions to minimize the risk of SARS-CoV-2 transmission implies that infected cell cultures and clinical specimens may undergo some sort of inactivation to reduce or abolish infectivity. We evaluated three heat inactivation protocols (56 °C-30 min, 60 °C-60 min and 92 °C-15 min) on SARS-CoV-2 using (i) infected cell culture supernatant, (ii) virus-spiked human sera (iii) and nasopharyngeal samples according to the recommendations of the European norm NF EN 14476-A2. Regardless of the protocol and the type of samples, a 4 Log TCID50 reduction was observed. However, samples containing viral loads > 6 Log TCID were still infectious after 56 °C-30 min and 60 °C-60 min, although infectivity was < 10 TCID. The protocols 56 °C-30 min and 60 °C-60 min had little influence on the RNA copies detection, whereas 92 °C-15 min drastically reduced the limit of detection, which suggests that this protocol should be avoided for inactivation ahead of molecular diagnostics. Lastly, 56 °C-30 min treatment of serum specimens had a negligible influence on the results of IgG detection using a commercial ELISA test, whereas a drastic decrease in neutralizing titers was observed.