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その結果、microRNA-936 は FGF2 発現をダウンレギュレーションし、P13K/Akt シグナル経路を活性化することで胃癌細胞の増殖と浸潤を促進していることが明らかになった
MicroRNA-936 promotes proliferation and invasion of gastric cancer cells by down-regulating FGF2 expression and activating P13K/Akt signaling pathway.
PMID: 32633361 DOI: 10.26355/eurrev_202006_21658.
抄録
目的:
本研究では、microRNA-936がFGF2の発現をダウンレギュレーションし、ホスファチジルイノシトール3キナーゼ/タンパク質キナーゼB（P13K/Akt）シグナル伝達経路を活性化することで、胃がん（GCa）の発症に関与するかどうかを検討しました。
OBJECTIVE: This study was designed to investigate whether microRNA-936 can be involved in the development of gastric cancer (GCa) by down-regulating FGF2 expression and activating the phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B (P13K/Akt) signaling pathway.
患者と方法:
定量的ポリメラーゼ連鎖反応（qPCR）を実施し、GCa組織サンプルおよび隣接する正常サンプル、さらにGCa細胞株においてmicroRNA-936およびFGF2の発現量を調べた。GCa 細胞株 BGC および SGC に microRNA-936 阻害剤をトランスフェクションした後、トランスウェルアッセイおよびセルカウンティングキット-8（CCK-8）アッセイにより、それぞれ細胞浸潤能および増殖能を評価した。また、microRNA-936とFGF2との結合関係を確認するために、Dual-Luciferase reporting assayを実施した。GCa細胞にmicroRNA-936阻害剤とsi-FGF2を同時にトランスフェクションした後、qPCRとウエスタンブロット実験を行いFGF2/P13K/Aktの発現を検出し、FGF2とPI3K/AKT経路におけるmicroRNA-936の制御をさらに検証した。
PATIENTS AND METHODS: Quantitative polymerase chain reaction (qPCR) was carried out to examine microRNA-936 and FGF2 levels in GCa tissue samples and adjacent normal ones, and further in GCa cell lines. After transfection of microRNA-936 inhibitor in GCa cell lines BGC and SGC, cell invasion, and proliferation abilities were evaluated by transwell and cell counting kit-8 (CCK-8) assays, respectively. In addition, the Dual-Luciferase reporting assay was conducted to verify the binding relationship between microRNA-936 and FGF2. After simultaneous transfection of microRNA-936 inhibitor and si-FGF2 in GCa cells, we detected the expression of FGF2/P13K/Akt by performing qPCR and Western blot experiments to further verify the regulation of microRNA-936 on FGF2 and PI3K/AKT pathway.
結果:
QPCR 検出により、GCa 組織サンプルでは microRNA-936 の発現が著しく上昇しているのに対し、FGF2 の発現は逆に低下しており、両者の間には負の相関関係があることが明らかになりました。また、正常胃粘膜細胞GESと比較して、GCa細胞株ではmicroRNA-936の発現が有意に増加していた。一方、microRNA-936のダウンレギュレーションは、GCa細胞の浸潤性および増殖性を著しく低下させた。デュアルルシフェラーゼレポーティングアッセイにより、microRNA-936はFGF2と直接結合していることが明らかになった。QPCR とウェスタンブロットにより、microRNA-936 は FGF2 の発現を抑制し、同時に PI3K/AKT 経路を活性化することが示された。さらに、FGF2をサイレンシングすることで細胞の増殖や浸潤性が亢進し、microRNA-936を同時にダウンレギュレーションすることでその効果が逆転することが明らかになった。以上のことから、microRNA-936はFGF2の発現を阻害し、PI3K/AKT経路を活性化することでGCaの進行を促進する可能性が示唆された。
RESULTS: QPCR detection revealed that microRNA-936 was remarkably up-regulated while FGF2 was conversely down-regulated in GCa tissue samples, indicating a negative correlation between the two. In addition, compared with normal gastric mucosal cells GES, microRNA-936 showed a significant increased expression in GCa cell lines. Meanwhile, down-regulation of microRNA-936 caused a marked reduction in invasive and proliferation ability of GCa cells. Dual-Luciferase reporting assay demonstrated a direct binding of microRNA-936 to FGF2. QPCR and Western blot showed that microRNA-936 can inhibit FGF2 expression and activate the PI3K/AKT pathway at the same time. Further studies found that silencing FGF2 induced an enhancement in cell proliferation and invasiveness, which could be reversed by simultaneous downregulation of microRNA-936. The above observations suggested that microRNA-936 may accelerate the progression of GCa by inhibiting FGF2 expression and activating the PI3K/AKT pathway.
結論:
microRNA-936 の過剰発現は、主に FGF2 の発現低下と P13K/Akt シグナル経路の活性化を介して GCa の発生に寄与すると考えられている。
CONCLUSIONS: Overexpression of microRNA-936 can be conducive to the development of GCa, mainly through the down-regulation of FGF2 and activation of the P13K/Akt signaling pathway.