ダニ表面の除染方法の分析

Analysis of Tick Surface Decontamination Methods.

• Angeline Hoffmann
• Volker Fingerle
• Matthias Noll

抄録

マダニには様々な微生物病原体が存在することが知られている。 しかし、ほとんどの研究では、マダニ表面を事前に除染することなくマダニのマイクロバイオームを評価しているため、結果が変化したり、マダニが媒介するマイクロバイオームの構成に関する結論を誤ったりする可能性がある。本研究の目的は、(i) 70%エタノール、(ii) DNA Away、(iii) 5%次亜塩素酸ナトリウム、(iv) 反応性皮膚除染ローション(RSDL)の4つの異なる除染方法を試験することである。除染の効率をテストするために、各ダニを、 , , , , , , , , , , , , , , , , , , , ,犬の唾液と人間の汗の定義された混合物で汚染した。ネガティブコントロールとして無汚染を使用し、ポジティブコントロールとして無汚染戦略を実施した。核酸抽出後、ｑＰＣＲによるＲＮＡおよびＤＮＡサンプルの汚染物質回収率、および細菌１６Ｓ ｒＲＮＡおよび１６Ｓ ｒＲＮＡ遺伝子アンプリコンシーケンシングによるダニ媒介マイクロバイオーム解析を行った。5%次亜塩素酸ナトリウムで処理したダニは、DNA Away、RSDL、70%エタノールに続いて汚染物質の数が最も少なかった。さらに、5%次亜塩素酸ナトリウム除染後のダニのマイクロバイオームは、陰性対照群にクラスター化していた。このことから，5%次亜塩素酸ナトリウムでの除染効率は最適であり，マダニ媒介病原体の不偏不党的な検出に対応するための今後の研究に推奨される．

Various microbial pathogens have been found in ticks such as . However, most studies assessed tick microbiomes without prior decontamination of the tick surface, which may alter the results and mislead conclusions regarding the composition of the tick-borne microbiome. The aim of this study was to test four different decontamination methods, namely (i.) 70% ethanol, (ii.) DNA Away, (iii.) 5% sodium hypochlorite and (iv.) Reactive Skin Decontamination Lotion (RSDL), which have been previously reported for tick surface and animal or human skin decontamination. To test the efficiency of decontamination, we contaminated each tick with a defined mixture of , , , dog saliva and human sweat. No contamination was used as a negative control, and for a positive control, a no decontamination strategy was carried out. After nucleic acid extraction, the recovery rate of contaminants was determined for RNA and DNA samples by qPCR and tick-borne microbiome analyses by bacterial 16S rRNA and 16S rRNA gene amplicon sequencing. Ticks treated with 5% sodium hypochlorite revealed the lowest number of contaminants followed by DNA Away, RSDL and 70% ethanol. Moreover, tick microbiomes after 5% sodium hypochlorite decontamination clustered with negative controls. Therefore, the efficiency of decontamination was optimal with 5% sodium hypochlorite and is recommended for upcoming studies to address the unbiased detection of tick-borne pathogens.